目的:脊髓損傷是嚴(yán)重的脊柱疾病并發(fā)癥,常導(dǎo)致?lián)p傷節(jié)段以下肢體的嚴(yán)重功能障礙,其發(fā)病率逐年上升。外源干細(xì)胞的移植為脊髓損傷的治療提供了嶄新思路。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）的自我更新和增值能力較強(qiáng)、來源廣泛、分離培養(yǎng)簡單,但是由于移植后的BMSCs在宿主體內(nèi)成活率及轉(zhuǎn)化率較低,因此限制了其廣泛應(yīng)用。B cell lymphoma/leukemia gene 2（Bcl-2）被認(rèn)為是能夠抑制細(xì)胞凋亡發(fā)生的抗凋亡基因,是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的基本成員,能對抗多種原因引起的細(xì)胞凋亡,。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建大鼠Bcl-2基因過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染BMSCs,將其移植入脊髓損傷大鼠的損傷部位,觀察療效。方法:1、培養(yǎng)和傳代大鼠BMSCs,使用倒置顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志性抗原CD44、CD45和CD90。構(gòu)建及鑒定Bcl-2基因慢表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染BMSCs,以獲得Bcl-2過表達(dá)的BMSCs,使用RT-PCR和westernblot技術(shù)檢測Bcl-2的表達(dá)量,使用MTT檢測細(xì)胞的增值效率。2、健康雄性8周齡SD大鼠20只,隨機(jī)分為4組,每組5只大鼠,采用分點(diǎn)注射的方法,在大鼠脊髓損傷建模手術(shù)... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

左圖為光學(xué)倒置顯微鏡（×100）下觀察；右圖為熒光倒置顯微鏡（×100）下觀察

1 BMSCs 細(xì)胞鑒定第三代細(xì)胞培養(yǎng)第十二天時(shí)，用倒置顯微胞體向胞核收縮，細(xì)胞呈雙極或多極狀，胞細(xì)長且相互連接交叉，為典型的神經(jīng)元細(xì)胞記物結(jié)果顯示： CD44 和 CD90 表達(dá)陽性，陽陰性，陽性率為 0.9%，結(jié)果如圖 2 所示。圖 1 左圖為光學(xué)倒置顯微鏡（×100）下觀察；右

RT-PCR檢測Bcl-2的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多效生長因子在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化中的表達(dá)變化[J]. 連霞,李光來,李東芳,薛國芳,裴宇恒.  中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志. 2017(11)
[2]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)皮膚創(chuàng)口愈合及Wnt信號通路在愈合過程中的作用[J]. 王志紅,黃漢,張斌,馬競,張佳.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2016(15)
[3]大鼠BMSCs的體外分離培養(yǎng)和鑒定[J]. 李樹貴,于海翔,楊光.  中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2011(11)
[4]PTEN基因沉默對BMSC氧糖剝奪模型的保護(hù)作用及其對Bcl-2凋亡通路的影響[J]. 陳毅,尹西盟,董寶鐵,范仲凱,劉丹平,屠冠軍.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(07)
[5]全骨髓法體外培養(yǎng)分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及PKH26標(biāo)記[J]. 葉小鳳,何援利,王雪峰,付霞霏.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(10)
[6]人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子基因修飾BMSCs經(jīng)靜脈移植對大鼠損傷脊髓結(jié)構(gòu)和功能影響的初步研究[J]. 林建華,王長昇,吳朝陽.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2010(08)
[7]人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性[J]. 鄭有華,何滔,匡世軍,張志光,蘇凱.  國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào). 2010(02)
[8]Survival of transplanted neurotrophin-3 expressing human neural stem cells and motor function in a rat model of spinal cord injury[J]. Martin OudegaO.  Neural Regeneration Research. 2009(07)
[9]大鼠B細(xì)胞淋巴瘤-2基因的克隆及其慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建[J]. 王雪峰,何援利.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2009(01)
[10]bcl-2和bax基因與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及在脊髓損傷中的作用[J]. 段有文,呂剛,吳海龍,唐穎,黃濤.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2005(10)

碩士論文
[1]經(jīng)Bcl-2基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對缺血性心功能不全兔心功能及血管新生的影響[D]. 高青.河北醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]hBDNF基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D]. 劉凱.福建醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：3607477