本文關(guān)鍵詞：納米碳酸鈣攜載25-羥基膽甾醇用作骨修復(fù)的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著創(chuàng)傷、感染、腫瘤、意外等因素造成的骨組織缺損現(xiàn)象越來越多,骨修復(fù)方法以及材料的研究越來越受到國內(nèi)外科研工作者的重視。新型的骨修復(fù)材料需要具備組織相容性,良好的生物可降解性以及優(yōu)良的骨誘導(dǎo)性。目前研究比較多的是組織工程骨,但組織工程骨需要將細(xì)胞、生物活性分子負(fù)載到支架材料上,制備工藝復(fù)雜且成本較高,因此研究具有成骨誘導(dǎo)性的骨修復(fù)材料依然是骨修復(fù)研究的重中之重。碳酸鈣作為自然骨的組成成分之一,具有良好的生物相容性和一定的骨傳導(dǎo)性,且與羥基磷灰石相比,碳酸鈣具備更好的生物可降解性,因此碳酸鈣具有應(yīng)用于骨修復(fù)材料的潛力。25-羥基膽甾醇具有良好的成骨誘導(dǎo)性,但其成骨誘導(dǎo)活性需要鈣離子的協(xié)助,因此本課題將25-羥基膽甾醇與制備的納米碳酸鈣復(fù)合,研究其對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化的影響,以期得到一種良好的骨修復(fù)材料。具體實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下:1)利用共沉淀法,在聚丙烯酸的調(diào)控下合成納米碳酸鈣顆粒(Rod-CC NPs),得到的納米碳酸鈣為表面粗糙的實(shí)心棒狀,平均長徑短徑分別為240和90 nm,平均長徑比為2.6,大小均一,分散性較好,晶型主要為方解石和少量的球霰石。其表面ζ電位為-22.25±0.35 mV,具備良好的水分散性;通過體外模擬實(shí)驗(yàn)研究了Rod-CC NPs的降解性能,結(jié)果顯示Rod-CC NPs在pH 7.4的條件下降解了22.6%,在pH 5.6條件下降解了45.2%;2)將Rod-CC NPs培養(yǎng)細(xì)胞后做細(xì)胞切片,用透射電鏡觀察細(xì)胞對(duì)顆粒的吞噬,結(jié)果顯示,Rod-CC NPs可以被包裹在囊泡內(nèi)運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)中;利用CCK-8法和細(xì)胞活死染色的方法驗(yàn)證納米顆粒的生物相容性,結(jié)果顯示Rod-CC NPs具有良好的細(xì)胞相容性,且有促進(jìn)MC3T3-E1生長的趨勢(shì);3)將Rod-CC NPs與25-HC進(jìn)行簡單的混合得到Rod-CC/25-HC復(fù)合物,復(fù)合物具有良好的分散性,且與納米顆粒復(fù)合之后可以明顯提高25-HC的細(xì)胞相容性;4)利用CCK-8法驗(yàn)證Rod-CC NPs、25-HC以及Rod-CC/25-HC組對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果顯示Rod-CC NPs和Rod-CC/25-HC組都可以顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖;5)通過檢測(cè)共培養(yǎng)3、7、14天后細(xì)胞的堿性磷酸酶活性,western blot法檢測(cè)共培養(yǎng)21天后骨鈣蛋白和骨唾液蛋白的分泌以及熒光定量PCR法檢測(cè)對(duì)應(yīng)基因mRNA的表達(dá),證明Rod-CC NPs、25-HC以及Rod-CC/25-HC組對(duì)成骨細(xì)胞的分化都有一定的促進(jìn)作用,且Rod-CC NPs及Rod-CC/25-HC組可以誘導(dǎo)成骨細(xì)胞的分化。
【關(guān)鍵詞】：碳酸鈣 納米顆粒 棒狀 25-羥基膽甾醇 骨修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R318.08;R68
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞8-13
• 第一章 緒論13-25
• 1.1 引言13
• 1.2 骨修復(fù)材料的研究現(xiàn)狀13-17
• 1.2.1 骨組織的構(gòu)成及生物學(xué)特性13-16
• 1.2.2 骨缺損治療方法16-17
• 1.3 納米碳酸鈣的研究現(xiàn)狀17-22
• 1.3.1 納米碳酸鈣的制備19-21
• 1.3.2 碳酸鈣用于骨修復(fù)的研究21-22
• 1.4 25-羥基膽甾醇（25-HC）22-23
• 1.5 本課題研究內(nèi)容23-25
• 第二章 納米碳酸鈣的制備、表征及細(xì)胞相容性分析25-45
• 2.1 引言25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器25-28
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 2.2.3 主要溶液的配制方法27-28
• 2.3 納米碳酸鈣的制備28-29
• 2.4 納米碳酸鈣的表征29-31
• 2.4.1 場發(fā)射掃描電鏡（FE-SEM）29
• 2.4.2 透射電鏡（TEM）29
• 2.4.3 X-射線衍射（XRD）29
• 2.4.4 紅外表征（FTIR）29-30
• 2.4.5 Zeta電位測(cè)試30
• 2.4.6 熱重分析（TGA）30
• 2.4.7 水分散性分析30
• 2.4.8 納米碳酸鈣的降解30-31
• 2.5 納米碳酸鈣的細(xì)胞吞噬及細(xì)胞相容性分析31-37
• 2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)31-34
• 2.5.2 細(xì)胞對(duì)納米碳酸鈣的吞噬34-35
• 2.5.3 CCK-8 法檢測(cè)納米碳酸鈣的細(xì)胞相容性35-36
• 2.5.4 活/死細(xì)胞染色法檢測(cè)碳酸鈣的細(xì)胞相容性36-37
• 2.5.5 數(shù)據(jù)分析37
• 2.6 結(jié)果與討論37-43
• 2.6.1 納米碳酸鈣的表征結(jié)果37-41
• 2.6.2 納米碳酸鈣的細(xì)胞吞噬41-42
• 2.6.3 納米碳酸鈣的細(xì)胞相容性結(jié)果42-43
• 2.7 本章小結(jié)43-45
• 第三章 Rod-CC/25-HC的復(fù)合、表征及細(xì)胞相容性分析45-53
• 3.1 引言45
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器45-46
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 3.2.2 主要儀器46
• 3.3 Rod-CC/25-HC復(fù)合物的制備46-47
• 3.4 Rod-CC/25-HC復(fù)合物的表征47-48
• 3.4.1 場發(fā)射掃描電鏡（FE-SEM）47
• 3.4.2 X-射線衍射（XRD）47-48
• 3.4.3 紅外表征（FTIR）48
• 3.5 Rod-CC/25-HC的細(xì)胞相容性分析48-49
• 3.5.1 CCK-8 法檢測(cè)納米碳酸鈣的細(xì)胞相容性48
• 3.5.2 活/死細(xì)胞染色法檢測(cè)碳酸鈣的細(xì)胞相容性48-49
• 3.5.3 數(shù)據(jù)分析49
• 3.6 結(jié)果與討論49-52
• 3.6.1 Rod-CC/25-HC的表征結(jié)果49-50
• 3.6.2 Rod-CC/25-HC的細(xì)胞相容性結(jié)果50-52
• 3.7 本章小結(jié)52-53
• 第四章 Rod-CC/25-HC用作骨修復(fù)的生物學(xué)評(píng)價(jià)53-71
• 4.1 引言53
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器53-57
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料53-54
• 4.2.2 主要儀器54-55
• 4.2.3 主要溶液配制方法55-57
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法57-63
• 4.3.1 Rod-CC/25-HC對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響57-58
• 4.3.2 Rod-CC/25-HC對(duì)成骨細(xì)胞分化的影響58-63
• 4.3.3 數(shù)據(jù)分析63
• 4.4 結(jié)果與分析63-70
• 4.4.1 Rod-CC/25-HC對(duì)成骨細(xì)胞增殖的作用結(jié)果63-65
• 4.4.2 Rod-CC/25-HC對(duì)成骨細(xì)胞分化的影響65-70
• 4.5 本章小結(jié)70-71
• 第五章 結(jié)論71-73
• 參考文獻(xiàn)73-80
• 個(gè)人簡歷及攻讀學(xué)位期間的研究成果80-82
• 致謝82

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