研究背景/目的:骨肉瘤是全世界最常見(jiàn)的骨原發(fā)惡性腫瘤,因其高度惡性和侵襲性,一度排行青少年癌癥死亡原因的第二位。近20到30年來(lái)骨肉瘤的治療進(jìn)展十分緩慢,5年或更長(zhǎng)期的總生存率并沒(méi)有得到顯著的改善。自噬（Autopahgy）是指通過(guò)溶酶體介導(dǎo)的細(xì)胞吞噬自身蛋白或細(xì)胞器并降解的一種高度保守的細(xì)胞現(xiàn)象。很多研究發(fā)現(xiàn),自噬參與了惡性腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移,但其作用十分復(fù)雜并富有爭(zhēng)議。探索自噬在骨肉瘤不同階段的作用和調(diào)控因素,有利于發(fā)現(xiàn)骨肉瘤治療的新分子靶點(diǎn)。TSSC3（Tumor-suppressing STF cDNA 3）是郭喬楠教授課題組在人成骨細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中利用基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)的出現(xiàn)明顯差異表達(dá)的印跡基因之一。前期研究已經(jīng)證實(shí)其在骨肉瘤中起到抑癌基因作用,但其分子機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。TSSC3的同源基因PHLDA1,被證實(shí)可以調(diào)控細(xì)胞自噬,提示TSSC3可能對(duì)自噬也有一定的調(diào)控作用。除此之外,有研究發(fā)現(xiàn)自噬調(diào)控通路PI3K/Akt/mTOR的活化可能受到Src的影響,而前期研究發(fā)現(xiàn)TSSC3可以抑制骨肉瘤Src的分子活性。由此我們推測(cè)骨肉瘤細(xì)胞中TSSC3可能通過(guò)Src與自噬發(fā)生聯(lián)系。... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

-2載體結(jié)構(gòu)圖

1-1-1 過(guò)表達(dá) TSSC3 后骨肉瘤細(xì)胞中自噬相關(guān)基因 mRNA 和蛋白表-1 The change of mRNA and protein expression of autophagy relatedTSSC3 overexpressed. *P < 0.05, compared to OverCtrl group

圖 2-1-1-2 過(guò)表達(dá) TSSC3 后自噬相關(guān)蛋白免疫熒光圖，標(biāo)尺 50 μmFig. 2-1-1-2 The image of the IF of autophagy related proteins in TSSC3 overexpressed cells2.1.2 TSSC3 過(guò)表達(dá)增加骨肉瘤細(xì)胞內(nèi)自噬流接著我們利用透射電鏡觀察，過(guò)表達(dá) TSSC3的 MTF 和 SaOS2 骨肉瘤細(xì)胞中，自噬小體或者自噬溶酶體的數(shù)量較對(duì)照組明顯增加（MTF 細(xì)胞平均每個(gè)細(xì)胞含0.45±0.15 個(gè) VS 過(guò)表達(dá)細(xì)胞 2.30±0.53 個(gè)，P＜0.01； SaOS2 細(xì)胞平均每個(gè)細(xì)胞含自噬小體或自噬溶酶體 0.30±0.15個(gè)細(xì)胞球 VS 過(guò)表達(dá)細(xì)胞 2.00±0.63 個(gè)，P<0.05，圖 2-1-2-1），提示 TSSC3 過(guò)表達(dá)促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞自噬體的合成。為了進(jìn)一步區(qū)別 TSSC3 導(dǎo)致自噬體的合成是阻滯了晚期自噬導(dǎo)致的堆積還是促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的自噬流，我們聯(lián)合應(yīng)用了自噬流阻滯劑 CQ。我們先試驗(yàn)了 CQ 的有效濃度（圖 2-1-2-2）發(fā)現(xiàn) CQ 在 8μmol/L 的情況下就可以明顯抑制骨肉瘤細(xì)胞自噬流，接著我們?cè)谶^(guò)表達(dá) TSSC3 的細(xì)胞中聯(lián)合應(yīng)用 CQ（8μmol/L 濃度），利用 WB 發(fā)現(xiàn) TSSC3+CQ組中 P62 和 LC3II 蛋白水平有進(jìn)一步明顯地增加，提示自噬流通暢；


本文編號(hào)：3602552