背景自體骨是植骨材料的“金標(biāo)準(zhǔn)”,然而取骨會(huì)造成嚴(yán)重的并發(fā)癥,臨床需要大量高活性骨替代材料。成骨性、骨誘導(dǎo)性和骨傳導(dǎo)性是影響骨愈合的核心因素。羥基磷灰石、β-磷酸三鈣、多聚乳酸等合成材料及脫鈣骨基質(zhì)（demineralized bone matrix,DBM）等天然生物材料缺乏成骨前體細(xì)胞和成骨誘導(dǎo)因子,成骨活性十分有限。經(jīng)典的組織工程骨（tissue engineered bone, TEB）成骨能力良好,但制備過(guò)程復(fù)雜,難以實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化。骨髓中含有豐富的成骨相關(guān)細(xì)胞和因子,既往研究表明骨髓局部注射或與支架材料復(fù)合可促進(jìn)骨愈合。通過(guò)選擇性細(xì)胞滯留（selective cell retention,SCR）技術(shù),可以有效地將骨髓中成骨成分富集于疏松多孔材料,從而實(shí)現(xiàn)高活性組織工程骨術(shù)中構(gòu)建。由于制備過(guò)程中細(xì)胞外基質(zhì)大量丟失,通常用于SCR技術(shù)的DBM支架材料骨髓富集效率相對(duì)有限,通過(guò)表面修飾增強(qiáng)支架材料粘附性是提高富集效率和特異性的有效手段。在前期研究中,課題組采用多聚賴(lài)氨酸、RADA-161水凝膠等修飾DBM支架材料,修飾后材料孔徑縮小,對(duì)細(xì)胞物理攔截作用增強(qiáng),材料骨髓富集效率和成骨... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１主要研究?jī)?nèi)容：（１）層層自組裝構(gòu)建ＬＢＬ－ｒＦＮ／ＣＤＨ多層蛋白界面修飾ＤＢＭ支架材料并檢??

清表達(dá)的蛋白活性高于包涵體［３（）＿３２］。根據(jù)前期誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們采用含０．５ｍＭ?ＩＰＴＧ??和０．５％甘油的ＬＢ培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)含有ｒＦＮ／ＣＤＨ融合基因的Ｒｏｓｅｔｔａ－ｇａｍｉ（ＤＥ３）重組細(xì)??菌，在細(xì)菌培養(yǎng)至培養(yǎng)基吸光度為０．６？０．８時(shí)，均出現(xiàn)少量可溶性表達(dá)（如圖２Ａ所示），??但從電泳結(jié)果來(lái)看，純化的蛋白純度很差，雖然在目的分子位置有明顯蛋白條帶，但比??例僅２０％左右，其他可能為截?cái)啾磉_(dá)或者降解帶，不適合用于實(shí)驗(yàn)。??如圖３所示，包涵體蛋白提取，Ｎｉ２＋金屬層析純化后，１０％?Ｅｌｕｔｉｏｎ?Ｂｕｆｆｅｒ洗脫蛋白??中含有大量ｒＦＮ／ＣＤＨ融合蛋白（分子量７５ｋＤ），純度高，可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求；１００％?Ｅｌｕｔｉｏｎ??Ｂｕｆｆｅｒ洗脫蛋白中含有較高純度的融合蛋白；將純化蛋白收集，以ＰＨ＝９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ??透析純化后，再次Ｎｉ２＋金屬層析純化后，三個(gè)批次制備的ｒＦＮ／ＣＤＨ融合蛋白均具有極??高的純度，僅在分子量＞１３０ＫＤ處有一雜帶，雜帶分子量為ｒＦＮ／ＣＤＨ的二倍，考慮為??其二聚體。??一一?：：：＿?－??２９??

接觸角反映的是材料表面對(duì)液體的親疏程度，本研究中以去離子水作為測(cè)量溶液，??接觸角越大，材料親水性越高，反之亦然。材料的親水性取決于材料表面的化學(xué)組成及??分子排列方式，因而在一定程度上可以反應(yīng)材料表面成分的變化。如圖４所示，脫蛋白??骨皮質(zhì)（第〇層）接觸角較大，親水性差，表面修飾ＰＥＩ后（第１層），其接觸角明顯??降低，此后隨修飾層數(shù)增加，接觸角不規(guī)則變化。當(dāng)修飾到第８層（－ＰＥＩ－ｒＦＮ／ＣＤＨ－??（Ｃｈｉ－ｒＦＮ／ＣＤＨ）３）以后，隨修飾層數(shù)增力口，接觸角波動(dòng)在３４°（ｒＦＮ／ＣＤＨ）或４５°（Ｃｈｉ），??接觸角趨于穩(wěn)定，提示層成分隨修飾層數(shù)增加外層結(jié)構(gòu)穩(wěn)定改變，即己形成穩(wěn)定的修飾??界面。由于修飾體系中缺乏其他可穩(wěn)定存留與材料表面的成分，我們可以推測(cè)這是由于??材料表面被Ｃｈｉ或ｒＦＮ／ＣＤＨ均勻涂布的結(jié)果，早期修飾過(guò)程中接觸角不規(guī)則變化可能??與最外層修飾大分子不能完全占據(jù)材料表面有關(guān)［３ｋ３３］。由于后期選擇性富集及體內(nèi)外實(shí)??驗(yàn)要求材料具有良好的穩(wěn)定性，我們采用修飾１２層的材料作為實(shí)驗(yàn)的最終材料，即??－ＰＥＩ－ｒＦＮ／ＣＤＨ－?（Ｃｈｉ－ｒＦＮ／ＣＤＨ）?５

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Platelet-rich plasma for regeneration of neural feedback pathways around dental implants: a concise review and outlook on future possibilities[J]. Yan Huang,Michael M Bornstein,Ivo Lambrichts,Hai-Yang Yu,Constantinus Politis,Reinhilde Jacobs.  International Journal of Oral Science. 2017(01)
[2]Application of platelet-rich plasma with stem cells in bone and periodontal tissue engineering[J]. Gabriela Fernandes,Shuying Yang.  Bone Research. 2016(04)
[3]Use of demineralized bone matrix in the extremities[J]. Georgios I Drosos,Panagiotis Touzopoulos,Athanasios Ververidis,Konstantinos Tilkeridis,Konstantinos Kazakos.  World Journal of Orthopedics. 2015(02)



本文編號(hào)：3582249