發(fā)布時間：2021-12-23 06:04

　　目的:本研究通過探討在急性神經(jīng)源性炎性痛模型中,用辣椒素激活瞬時感受器電位香草酸受體1（transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）后對L_4-6背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion,DRG）神經(jīng)元細胞中鈉鉀氯共轉運體（sodium-potassium-chloride co-transporter 1,NKCC1）及其發(fā)生磷酸化后p-NKCC1的蛋白表達的變化,還有對其功能改變的影響,以及調控兩個蛋白之間的內在機制,來闡明兩個蛋白在疼痛產(chǎn)生的過程中可能發(fā)揮的作用和關系。方法:本研究將180-250 g的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠作為本研究的主體,將它們隨機分為:正常組、辣椒素組和抑制劑組。正常組采用未經(jīng)任何處理過的大鼠作為對照,辣椒素組采用足底給予辣椒素（3mg/ml）模擬急性神經(jīng)源性炎性痛模型,抑制劑組采用在造模前鞘內給予抑制劑布美他尼、GF109203X或U0126。首先采用免疫熒光的方法在正常的大鼠DRG上對TRPV1和NKCC1的分布進行觀察。然后運用熱輻射刺激儀和丙酮實驗... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常大鼠DRG神經(jīng)元NKCC1和TRPV1免疫熒光共表達情況

min、120 min 分別對大鼠進行熱痛覺敏感和冷刺激敏感的測定（見圖 2）。發(fā)現(xiàn)辣椒素組大鼠與正常組大鼠相比 TWL 明顯降低，且在 60 min 的時候熱痛覺最敏感（正常組 vs. 辣椒素組，22.2115±1.0096 vs. 15.2885±1.3462，p < 0.001，n=6），而 CWL 明顯延長（正常組 vs. 辣椒素組，1.1728±0.6790 vs. 20.0617±2.0370，p < 0.001，n=6），且在 60 min 左右可見大鼠抬足、舔足時間明顯增加（p < 0.001, n=6），這表明它在 60 min 的時候疼痛達到最明顯，對疼痛最敏感。而提前鞘內給予 NKCC1 抑制劑布美他尼（5 μg/μl）后再足底給予辣椒素，發(fā)現(xiàn)抑制劑組大鼠的 TWL（辣椒素組 vs. 布美他尼組，15.2885±1.3462 vs. 19.1345±0.9135，p < 0.001，n=6）（圖 2A）和 CWL（辣椒素組 vs. 布美他尼組，20.0617±2.0370 vs. 9.1358±1.0494，p < 0.001, n=6）（圖 2B）均有所恢復。結果表明足底給予辣椒素后熱和冷刺激存在痛覺過敏現(xiàn)象。

大鼠DRG上TRPV1和NKCC1在疼痛中作用機制的研究19圖3正常組和辣椒素組大鼠DRG神經(jīng)元上NKCC1和p-NKCC1的表達情況。Fig.3ImmunofluorescenceexpressionofNKCC1andp-NKCC1onDRGneuronsofthenormalratsandcapsaicingroup.注：（A）免疫熒光顯示給予辣椒素后NKCC1和p-NKCC1表達情況（n=6）。白色箭頭顯示NKCC1在細胞核膜上表達，比例尺=25μm；（B）NKCC1的熒光密度強度和p-NKCC1的熒光密度強度；（C）正常組和辣椒素組NKCC1的核膜在細胞膜上的表達比例。*p<0.05,**p<0.01與正常組比較。Note:(A)ImmunofluorescenceshowingtheexpressionofNKCC1andp-NKCC1aftercapsaicinadministration(n=6).ThewhitearrowshowstheexpressionofNKCC1onthenuclearmembraneofthecell,Scalebar=25μm;(B)IntensityoffluorescencedensityofNKCC1;Intensityoffluorescencedensityofp-NKCC1;(C)ProportionofnuclearmembraneexpressiononthecellmembraneofNKCC1inthenormalgroupandthecapsaicingroup.*p<0.05,**p<0.01comparedwiththecontrolgroup.通過Westernblotting，免疫熒光和PCR技術分別檢測給予辣椒素之后NKCC1和p-NKCC1的蛋白表達情況，以及它們的分布情況。免疫熒光的結果顯示，辣椒素組中DRG神經(jīng)元上NKCC1的免疫熒光密度相比正常組表達要高一些（正常組vs.辣椒素組，19.3269±1.41421vs.25.5660±1.45664，p<0.05）（圖3A和3B），而且辣椒素組中DRG神經(jīng)元上NKCC1在中小細胞核膜上的表達也顯著增加（正常組vs.辣椒素組，0.0542±0.0203vs.0.5627±0.0068，p<0.001）（圖3A和3C）；另外，辣椒素組中p-NKCC1在中小型DRG神經(jīng)元細胞的細胞膜和細胞質上的免疫熒光密度比正常組表達要高（正常組vs.辣椒素組，30.4275±1.19430vs.36.3270±1.12430，p<0.05）（圖3


本文編號：3547932