發(fā)布時(shí)間：2021-12-23 06:34

　　研究背景:創(chuàng)傷、腫瘤和先天缺陷都會導(dǎo)致骨缺損,需要骨組織工程搭建支架材料進(jìn)行缺損修復(fù)。種子細(xì)胞植入生物相容性支架上修復(fù)骨缺損具有十分重要的治療作用。然而,由于支架內(nèi)缺乏血管,種子細(xì)胞會暫時(shí)缺氧和營養(yǎng)缺乏,在骨折形成血腫部位氧氣濃度低至0.8%,與空氣中20%氧氣濃度相比低得多,在骨缺損支架的中心,氧氣濃度可能比血腫更低,因?yàn)榻M織液通過復(fù)合支架材料滲透較慢。研究表明,在骨缺損的復(fù)合支架材料中,只有一小部分種子細(xì)胞存活。在低氧甚至缺氧的惡劣條件下,對外周血間充質(zhì)干細(xì)胞的影響尚不完全清楚,通過探討低氧對外周血間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、存活、遷移以及成骨分化的影響,對創(chuàng)造適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)或體內(nèi)移植條件,以保持種子細(xì)胞的成骨潛力具有重要的指導(dǎo)意義。研究方法:本研究將從大鼠左心室抽取外周血并提取出外周血間充質(zhì)干細(xì)胞（PBMSCs）,培養(yǎng)于氧濃度分別為1%、9%和21%的低氧小腔室中。細(xì)胞增殖使用CCK8試驗(yàn)檢測;用活/死細(xì)胞染色來檢測細(xì)胞的存活情況:細(xì)胞的遷移能力用平板劃痕試驗(yàn)檢測;用RT-qPCR、Western blotting檢測堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣蛋白（OCN）、成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體（Oste... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?ＰＢＭＳＣｓ在不同氧濃度下的細(xì)胞增殖，存活和遷移

和蛋白的表達(dá)。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測細(xì)胞在１％、９％和２１％氧濃度條件下分別??成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)１４天后Ｎｏｔｃｈｌ的蛋白，結(jié)果顯示三個氧濃度的慢病毒轉(zhuǎn)染組??Ｎｏｔｃｈｌ蛋白明顯下降，而慢病毒空載體組顯著高于慢病毒轉(zhuǎn)染組（圖５Ａ）。然??而，在ｓｉＲＮＡ下調(diào)Ｎｏｔｃｈｌ表達(dá)后，通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測細(xì)胞Ｒｕｎｘ２?（成??骨分化的最重要標(biāo)志物）的蛋白質(zhì)表達(dá)，結(jié)果表明Ｒｕｎｘ２蛋白明顯增加，與慢??病毒空載體組相比，具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，慢病毒轉(zhuǎn)染組的三個氧濃度間無??明顯差異（圖５Ｂ）。因此，在低氧條件下Ｎｏｔｃｈｌ表達(dá)增多可能抑制Ｒｕｎｘ２蛋白??生成。??ａ?０．８－］?■?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ??＾?Ｎｏｔｃｈｌ－ｓｉＲＮＡ??Ｃ?林??ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?Ｎｏｔｃｈｌ－ｓｉＲＮＡ?｜?｜?〇６－．??１％?９％?２１％?１％?９％?２１％?｜?＊＊??Ｓ?窆?０．４－?■??＿?＿＿?？?？?????？?？?？?

?明顯差異的。因此，Ｎｏｔｃｈｌ下調(diào)促進(jìn)了?ＡＬＰ活性和成骨礦化，同時(shí)也消除了不??同氧濃度引起的差異，１％低氧濃度抑制成骨分化作用被解除（圖６Ｂ）。這些數(shù)??據(jù)表明Ｎｏｔｃｈｌ下調(diào)恢復(fù)了?ＴＯＭＳＣｓ的成骨分化能力。??Ａ?ＡＬＰ?ＲＵＮＸ２??ｋ｜｜?ｌ?ｊ?ｋ｜］?１１??、／?＇、／?ｙ、?ａ、／??，ｃ／?／■??麵?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?＿?ＮｏｔｃＭ－ｓｉＲＮＡ?麵?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?隱?ＮｏｔｃＭ－ｓｉＲＮＡ??ＯＳＴＥＲＩＸ?〇ＣＮ??＿?ｔｉｌ??、／?、／?、／?、／?、／?，、??＾?／■??臟?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?畫?Ｎ〇ｔｃｈ１－ｓｉＲＮＡ?麵?ＮＣ．ｓｉＲＮＡ?畫?Ｍｏｔｃｈｌ－ｓｉＲＮＡ??３８??


本文編號：3547979