背景及目的骨關(guān)節(jié)炎的病理改變通常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨的不規(guī)則缺損。由于關(guān)節(jié)軟骨中缺乏血管和神經(jīng),一旦損傷后,人體自身對其修復(fù)能力極其有限,組織工程再生醫(yī)學(xué)的出現(xiàn)和發(fā)展為我們帶來了修復(fù)病損關(guān)節(jié)軟骨的希望。本研究旨在評價(jià)從使用Kartogenin預(yù)處理過后的髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞中提取的外泌體的作用,明確其促進(jìn)軟骨缺損修復(fù)的能力及可行性,并探究在該外泌體中發(fā)揮主要作用的內(nèi)容物性質(zhì)及相關(guān)機(jī)制。方法及結(jié)果第一部分:Kartogenin預(yù)處理對髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體促進(jìn)軟骨細(xì)胞成軟骨能力的作用研究研究方法:（1）從兔髕下脂肪墊中提取分離髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞,并進(jìn)行傳代培養(yǎng);（2）使用流式細(xì)胞儀檢測間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34、CD45、CD73、CD90、和CD105等,并對間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨、成脂、成軟骨三系誘導(dǎo)分化,鑒定其多向分化潛能;（3）使用Kartogenin預(yù)處理間充質(zhì)干細(xì)胞,收集預(yù)處理后及未處理的兩種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)過程中的上清液,使用超速離心法收集兩種干細(xì)胞所分泌的外泌體;（4）使用Western blot檢測兩種外泌體中特異性表面蛋白表達(dá)情況,使用BCA法檢測所提取外泌體... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

兔髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞顯微鏡下攝片

2、髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定1）IPFP-MSCs 表面抗原的表達(dá)鑒定為了確定上述所提取到的髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞是否符合標(biāo)準(zhǔn)，我們選取 IPFP-MSCsP3 生長良好的細(xì)胞，按前文所述方法進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果表明陽性抗體 CD73、CD90、CD105 表達(dá)均為陽性，且陽性率達(dá)到 99%以上，陰性抗體 CD34、CD45 表達(dá)為陰性，陽性率在 1%以下(圖 1-2)，結(jié)果表明我們提取到的確實(shí)為髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞，且純度符合實(shí)驗(yàn)要求。

圖 1-3：髕下脂肪墊間充質(zhì)干細(xì)胞三向分化實(shí)驗(yàn)。a：成骨誘導(dǎo)分化后茜素紅染色，b：成脂誘導(dǎo)分化后油紅 O 染色，c：成軟骨誘導(dǎo)分化后甲苯胺藍(lán)染色3、軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定將術(shù)中獲取的膝關(guān)節(jié)軟骨塊按照上述方法培養(yǎng)獲得原代軟骨細(xì)胞，培養(yǎng) 2 周時(shí)間，細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部，顯微鏡下觀察可見細(xì)胞呈圓形或卵圓形，細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為豐滿，細(xì)胞與細(xì)胞間有突起相互連接（圖 1-4a）。為鑒定其是否為軟骨細(xì)胞，選擇 P2 代生長良好的細(xì)胞，使用甲苯胺


本文編號：3543974