肝臟移植是治療終末期肝臟疾病的最常用且最有效的治療手段,而肝臟缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury,IRI)是肝移植過程中不可避免的病理生理過程,常常會導致嚴重的移植后并發(fā)癥,且極大的限制了邊緣性供肝的有效利用,因此解決或減輕肝臟IRI,將會使移植后患者和等待移植患者受益。ALDH2(acetaldehyde dehydrogenase 2,乙醛脫氫酶2)是一種醛脫氫酶,其在病理生理狀態(tài)下,能將外源性和內(nèi)生性的高毒性醛類氧化成低毒性的乙酸,從而發(fā)揮重要的生理功能。近來,已有研究表明ALDH2在氧化應激,乙醇相關疾病中發(fā)揮重要的作用。然而,其在肝臟缺血再灌注過程中的作用尚未報道。本研究旨在探討激活ALDH2對肝臟IRI的保護作用及相關機制研究。第一部分在小鼠的肝臟IRI模型中,通過采用Q-PCR、Western blot、酶活性檢測、免疫組織化學等方法,檢測肝臟組織中的ALDH2的mRNA和蛋白水平變化,我們發(fā)現(xiàn)IRI并不能引起ALDH2的表達變化和分布,進一步檢測發(fā)現(xiàn)IRI使ALDH2的酶活性明顯減低,造成大量的毒性醛類物質(zhì)的聚集。進一步研究表明應用A...

【文章來源】： 上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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摘要
ABSTRACT
中英文縮寫字母表
緒論
第一章 ALDH2 在肝臟缺血再灌注損傷中的表達變化
    1.1 引言
    1.2 實驗材料
        1.2.1 實驗動物
        1.2.2 實驗儀器及耗材
        1.2.3 實驗試劑
        1.2.4 溶液配制
    1.3 實驗方法
        1.3.1 小鼠 70%肝臟缺血再灌注損傷模型建立及樣本采集
        1.3.2 總RNA抽提
        1.3.3 cDNA合成
        1.3.4 實時熒光定量PCR
        1.3.5 免疫印跡檢測(Western blot)
        1.3.6 石蠟包埋
        1.3.7 石蠟組織切片
        1.3.8 免疫組織化學
        1.3.9 肝組織內(nèi)MDA檢測
        1.3.10 肝組織 ALDH2 酶活性檢測
        1.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法
    1.4 實驗結(jié)果
        1.4.1 肝臟缺血再灌注損傷不影響 ALDH2 表達和分布
        1.4.2 肝臟缺血再灌注損傷使ALDH2 酶活性降低
        1.4.3 Alda-1 預處理能夠明顯增加 ALDH2 酶活性
        1.4.4 Alda-1 預處理不改變ALDH2 的表達和分布
    1.5 本章小結(jié)
第二章 Alda-1 預處理改善肝臟缺血再灌注損傷
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 實驗儀器及耗材
        2.2.3 實驗試劑
        2.2.4 溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 小鼠 70 %肝臟缺血再灌注損傷模型建立及樣本采集
        2.3.2 小鼠原代肝細胞分離
        2.3.3 小鼠原代肝細胞缺氧再復氧模型
        2.3.4 血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT/AST)檢測
        2.3.5 石蠟包埋及組織切片
        2.3.6 蘇木素-伊紅染色(HE 染色)及 Sukuzi 評分
        2.3.7 RNA抽提,逆轉(zhuǎn)錄,定量PCR
        2.3.8 免疫印跡檢測(Western blot)
        2.3.9 肝臟切片TUNEL法檢測細胞凋亡
        2.3.10 免疫組織化學
        2.3.11 小鼠原代肝細胞細胞活性檢測
        2.3.12 小鼠原代肝細胞細胞毒性檢測
        2.3.13 線粒體膜電位檢測
        2.3.14 線粒體ROS檢測
        2.3.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 Alda-1 預處理減輕肝臟缺血再灌注損傷
        2.4.2 Alda-1 預處理減輕肝臟缺血再灌注損傷中的細胞凋亡程度
        2.4.3 Alda-1 預處理減輕肝臟缺血再灌注損傷中的炎性反應
        2.4.4 Alda-1 預處理減輕肝細胞缺氧復氧中的ROS水平并維持線粒體膜電位
    2.5 本章小結(jié)
第三章 ALDH2 激活保護肝臟缺血再灌注損傷依賴于AMPK介導的自噬增強
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 實驗儀器及耗材
        3.2.3 實驗試劑
        3.2.4 溶液配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 小鼠 70 %肝臟缺血再灌注損傷模型建立及樣本采集
        3.3.2 血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT/AST)檢測
        3.3.3 石蠟包埋及組織切片
        3.3.4 蘇木素-伊紅染色(HE 染色)及 Sukuzi 評分
        3.3.5 透射電鏡檢測細胞自噬小體
        3.3.6 免疫印跡檢測(Western blot)
        3.3.7 小鼠原代肝細胞分離
        3.3.8 小鼠原代肝細胞缺氧再復氧模型
        3.3.9 小鼠原代肝細胞細胞活性檢測
        3.3.10 小鼠原代肝細胞細胞毒性檢測
        3.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 Alda-1 預處理增強肝臟細胞自噬
        3.4.2 阻斷自噬能夠逆轉(zhuǎn)Alda-1 的保護作用
        3.4.3 Alda-1 預處理引起的自噬水平提高和 AMPK 激活相關
        3.4.4 阻斷 AMPK 能夠逆轉(zhuǎn) Alda-1 的保護作用
    3.5 本章小結(jié)
第四章 全文總結(jié)與展望
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 研究展望
參考文獻
致謝
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本文編號：3543597