目的:肝臟移植是終末期肝病唯一有效的治療手段。然而供體的短缺嚴(yán)重制約了肝移植手術(shù)的開展,大量等待肝臟移植的患者在等待過程中失去了治療機會。為了解決供體的短缺,歐美移植中心重新關(guān)注并開始越來越多的利用心臟死亡供體（Donation after cardiac death,DCD）。然而與腦死亡供體（Donation after brain death,DBD）相比,DCD經(jīng)歷了熱缺血損傷,更容易出現(xiàn)原發(fā)性移植物無功能（primary non-function,PNF）、早期移植物功能不良（poor early graft function,PEGF）以及缺血性膽道疾病等并發(fā)癥。在我國,由于沒有腦死亡標(biāo)準(zhǔn)的法律規(guī)定,DCD成為了我國器官捐獻最主要的來源。因此,如何減輕肝臟的缺血再灌注損傷,同時對供肝的質(zhì)量進行評估以決定是否使用,是目前肝臟移植研究中的重中之重。缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion?injury,IRI）是肝移植術(shù)后導(dǎo)致器官丟失的主要原因。IRI的機制包括:氧自由基爆發(fā)、細胞內(nèi)鈣超載、酸中毒、炎性細胞反應(yīng)等,而其中氧自由基爆發(fā)被認為是啟動因素,在缺血再灌注... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

大鼠肝移植情況

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文9圖1-2大鼠肝移植學(xué)習(xí)曲線/生存曲線2.3.2研究指標(biāo)及方法2.3.2.1手術(shù)基本情況記錄所有大鼠的重量，受體手術(shù)時間，無肝期時間，準(zhǔn)確的冷保存時間。2.3.2.2琥珀酸鹽含量測定假手術(shù)組開腹后先游離肝周韌帶，結(jié)扎切取肝乳頭葉1，脾靜脈持續(xù)注射生理鹽水10min，60min后分別結(jié)扎切取肝乳頭葉2，肝三角葉，24h后切取肝左外葉，分別置入-80°C液氮保存，左外葉切取一塊快速置于10%的中性甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋。各移植組于缺血前切取肝乳頭葉1，置入-80°C液氮保存，脾靜脈持續(xù)注射藥物后經(jīng)歷熱缺血60min和冷保存2h切取肝乳頭葉2，置入-80°C液氮保存，受體門靜脈通血后1h結(jié)扎切取肝三角葉，置入-80°C液氮保存，受體門靜脈通血后24h切取肝左外葉，置入-80°C液氮保存。測定方法參照文獻[21]，測定原理：通過琥珀酰輔酶A合成酶（SCS），丙酮酸激酶（PK），L-乳酸脫氫酶（L-LDH）等酶催化反應(yīng)的酶分析法測定。（1）在琥珀酰輔酶A合成酶（SCS）的催化下，琥珀酸鹽（Succinate）、三磷酸腺苷（ATP）和輔酶A（CoA）發(fā)生反應(yīng)，生成琥珀酰輔酶A（succinyl-CoA）、二磷酸腺苷（ADP）和磷酸（Pi）。（2）在丙酮酸激酶（PK）的催化下，ADP和磷酸烯醇丙酮酸鹽（PEP）反應(yīng)生成ATP和丙酮酸鹽（pyruvate）。

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文14TBS洗一次，10分鐘。5）化學(xué)發(fā)光在工作臺上鋪一張保鮮膜，將PVDF膜放在保鮮膜上。將化學(xué)發(fā)光的A和B兩種試劑在EP管內(nèi)等體積混合，然后均勻滴在PVDF膜的蛋白面，反應(yīng)2分鐘后，將PVDF膜上多余的發(fā)光工作液吸干，之后轉(zhuǎn)移到灰度儀中。6）凝膠圖象分析將膠片進行拍照，用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析光密度值，進行條帶灰度值測定，以與內(nèi)參的比值作為相對表達量。2.3.2.8統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。使用Shapiro-Wilk鑒定數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。根據(jù)正態(tài)分布測試（Shapiro–Wilktest），計數(shù)資料使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）來表示。所有連續(xù)數(shù)據(jù)使用StudentNewman-Keul’s檢驗和Studentt檢驗進行檢測。每兩組之間的比較使用單因素方差分析One-WayANOVA。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。對熒光顯微鏡觀察的染料或熒光強度采用ImageJ圖像分析系統(tǒng)進行分析處理。圖片使用GraphPrism7.0制作。3結(jié)果3.1大鼠肝臟缺血各時期琥珀酸鹽量的變化圖1-3大鼠肝臟缺血各時期琥珀酸鹽量的變化：與熱缺血0min比較，P<0.05；#：與熱缺血30min相比，P<0.05；&：與熱缺血60min


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