背景及目的:骨關節(jié)炎（osteoarthritis,OA）是一種與關節(jié)軟骨細胞凋亡和細胞外基質（extracellular matrix,ECM）降解相關的慢性疼痛致殘性疾病。近年發(fā)現,軟骨細胞自噬的缺失在OA進展中起關鍵作用。自噬是細胞在應激條件下降解細胞內成分循環(huán)利用,維持必需的細胞功能的適應性反應。雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）是一種新型大環(huán)內酯類免疫抑制劑,可以抑制mTOR信號通路的mTORC1,從而激活自噬。已有研究表明自噬對OA軟骨細胞有保護作用。目前研究自噬對軟骨細胞凋亡的影響鮮有報道。本研究應用體外培養(yǎng)軟骨細胞方法,探討地塞米松（dexamethasone,DEX）誘導軟骨細胞凋亡的可能損傷機制,并通過RAPA激活軟骨細胞自噬,研究自噬在DEX誘導軟骨細胞凋亡中的影響,以期為OA的預防和治療提供新依據。方法:從5位股骨頸骨折需行髖關節(jié)置換術患者和7位實施全膝關節(jié)置換術晚期OA患者的關節(jié)軟骨中分別分離培養(yǎng)獲得正常和OA軟骨細胞。將成功培養(yǎng)的第二代軟骨細胞分為以下6組,正常軟骨細胞加BSA至終濃度為100ug/ml培養(yǎng)12h;正常軟骨DEX組細胞加DEX-BSA至... 

【文章來源】：內蒙古醫(yī)科大學內蒙古自治區(qū)

【文章頁數】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

自噬的信號轉導途徑及發(fā)生過程

22內蒙古醫(yī)科大學碩士研究生學位論文（2019）標準差( +SD)描述，計量資料兩組間比較用獨立樣本 t 檢驗，以 P＜0.05 表明兩組間有統計學差異。3 結果3.1 軟骨細胞的分離培養(yǎng)及鑒定3.1.1 分離培養(yǎng)實驗中經二步酶消化法分離獲得原代軟骨細胞，呈球形懸浮狀，折光性較強，大小較一致。大多數約 14 天左右爬滿瓶底，最初細胞每 5-8 個成群分布，爬滿瓶底時細胞胞體豐滿，胞質均勻。在培養(yǎng) 3、7、10、13 天后細胞形態(tài)見圖 2。軟骨細胞經傳代后貼壁時間較原代軟骨細胞短，增殖速率加快，約 7-8 天大部分呈橢圓形，部分呈梭形鋪滿培養(yǎng)瓶瓶底。隨傳代次數增多，梭形、多角形細胞逐漸增加，其增殖及分泌能力下降，傳代周期延長。

圖 3 軟骨細胞核呈深染的藍色，細胞質呈淺紫色3.1.3 II 型膠原免疫熒光染色鑒定此法利用軟骨細胞分泌的 II 型膠原與抗 II 型膠原抗體特異結合，酶標抗再與抗 II 型膠原抗體結合顯色，對軟骨細胞作出定性鑒定。原代軟骨細胞 II膠原免疫熒光染色后在倒置熒光顯微鏡下可見細胞及少部分 ECM 為亮綠色，陽性（見圖 4）。Collagen II DAPI Merge


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