目的:本研究探討miR-155在小鼠創(chuàng)傷性腦損傷后腸黏膜屏障損傷中的作用機(jī)制。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)下調(diào)miR-155表達(dá)對上皮間緊密連接蛋白claudin-1表達(dá)的調(diào)控對腸黏膜屏障功能的影響。探索干預(yù)miR-155/claudin-1的手段,研究其對創(chuàng)傷動(dòng)物模型中腸黏膜屏障功能的影響,并探討其用于治療腸黏膜屏障功能障礙的有效性和可行性。方法:腦損傷小鼠模型使用改良后的Feeney自由落體腦損傷裝置建立。選取24只健康雄性小鼠隨機(jī)分成4組:A組正常對照組（Sham組）、B組腦外傷小鼠模型組（TBI組）、C組腦外傷小鼠模型miR-155-shRNA干擾組（Anti組）、D組腦外傷小鼠模型陰性控制組（NC組）,并制備含有miR-155的病毒載體,分別對C組、D組腦損傷處注射相關(guān)病毒,來模擬miR-155下調(diào)。收集小鼠小腸組織標(biāo)本后,RT-qPCR檢測小鼠腸組織miR-155的相對表達(dá)量、小鼠腸黏膜組織HE染色觀察腸黏膜組織的鏡下特點(diǎn)、免疫組化染色等觀察小鼠腸黏膜claudin-1的陽性顆粒表達(dá)情況,評(píng)估腸黏膜屏障功能狀態(tài)。結(jié)果:各組于造模后第5d處死小鼠取小腸組織,RT-qPCR結(jié)果顯示與Sham組... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

輔助質(zhì)粒圖譜

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文12相應(yīng)的病毒轉(zhuǎn)染后再次消毒，縫合頭皮，預(yù)防感染的抗生素為：青霉素8萬單位/只腹腔注射，隨后置于電熱爐旁觀察1h，待麻醉蘇醒后將小鼠按實(shí)驗(yàn)分組歸籠，放回清潔鼠籠內(nèi)繼續(xù)觀察。作為正常對照組，Sham組小鼠麻醉后僅用顱骨鉆鉆孔但不進(jìn)行自由落體裝置撞擊。每次撞擊前均需先消毒撞擊針頭以避免交叉感染。ab圖2自由落體腦損傷裝置（a）和打擊小鼠的骨窗位置（b）Figure2Free-fallingbraininjurydevice(a)andthelocationofthebonewindowinthestrikingmice(b)2.2.3收集標(biāo)本各組的小鼠在造模5d后通過摘除眼球采血并用頸椎脫臼法處死小鼠。剖開小鼠腹腔小心摘除小腸，注意勿使腸系膜組織殘留。將小腸放入冰鹽水中，用小鼠灌胃針插入小腸近端，通過灌胃針用注射器反復(fù)地注入冰鹽水，直至遠(yuǎn)端小腸再無糞便流出。將小腸近、遠(yuǎn)段小腸各5cm剪去，將修剪好的腸段分為4份，1份置入4%的多聚甲醛固定（至少24h），浸泡后行組織形態(tài)學(xué)檢查，其余3份置入RNA保存液Trizol中保存并放置于-80℃冰箱以備后續(xù)PCR檢測。以腺相關(guān)病毒（AAV）為載體構(gòu)建小鼠miR-155-5p抑制劑，將其轉(zhuǎn)染給小鼠，PCR檢測小腸組織中miR-155的表達(dá)水平并觀察術(shù)后第5d的腸黏膜病理改變。2.2.4PCR檢測小腸組織中miR-155水平聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction，PCR）的實(shí)驗(yàn)原理為與熒光指示染料在單管PCR的擴(kuò)增和測定步驟結(jié)合使用，測定相關(guān)目的基因的含量。其含量的測定結(jié)果依賴于測定增加的熒光信號(hào)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與每一次PCR循環(huán)的產(chǎn)物量成正比。此外，在單次反應(yīng)中，用不同染料標(biāo)記的探針能夠監(jiān)測和定量多標(biāo)記的目的基因。熒光閾值：在熒光擴(kuò)增曲線指數(shù)增長期設(shè)定一個(gè)熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)（即PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量標(biāo)準(zhǔn)）。熒光閾值可設(shè)

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文23結(jié)果1TBI小鼠建模、術(shù)后行為學(xué)表現(xiàn)及各組小鼠術(shù)后5d生存曲線1.1TBI小鼠建模參照Feeney自由落體模型建立腦損傷小鼠模型，通過調(diào)節(jié)撞擊錘的質(zhì)量和下落的高度來復(fù)制不同程度的創(chuàng)傷性腦損傷模型。小鼠腦損傷嚴(yán)重程度與打擊力度相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)撞擊小鼠左側(cè)大腦半球，其撞擊深度小于1.5mm為限模擬中度顱腦損傷。Sham組小鼠及TBI組小鼠處死后腦組織的大體標(biāo)本如圖3所示。ab圖3Sham組（a）和TBI組（b）腦組織的大體標(biāo)本Figure3GrossspecimensofbraintissuefromTBIgroup(a)andShamgroup(b)1.2小鼠昏迷及神經(jīng)反射抑制時(shí)間包括正常對照組在內(nèi)的所有實(shí)驗(yàn)小鼠建模后均呈昏迷狀態(tài)，小鼠意識(shí)和神經(jīng)反射抑制時(shí)間存在個(gè)體差異，總體來看，建模后小鼠昏迷時(shí)間越長，表明顱腦損傷越重，各組小鼠昏迷及神經(jīng)反射抑制時(shí)間如表13所示，其中Sham組小鼠的昏迷時(shí)間、疼痛時(shí)間、翻正反射恢復(fù)時(shí)間均小于TBI組、Anti組、NC組（P＜0.05），小鼠全身狀況良好，生命體征平穩(wěn)。而TBI組、Anti組、NC組小鼠的昏迷時(shí)間、疼痛時(shí)間、翻正反射恢復(fù)時(shí)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3500049