目的:甲狀腺切除術(shù)后甲狀旁腺功能減退癥是一種常見的,災(zāi)難性的,醫(yī)源性損傷,發(fā)生率較高。目前現(xiàn)有的藥物替代療法效果不盡如人意。探索建立脂肪源性干細胞（ADSCs）分化成甲狀旁腺樣細胞的方法,從而找到可供甲狀旁腺自體移植充足的種子細胞,為臨床徹底治愈甲旁減開辟一條新途徑。方法:切取SD大鼠腹股溝區(qū)脂肪,采用酶消化法和細胞貼壁分離的方法,分離、培養(yǎng)和純化出ADSCs,行成脂誘導(dǎo)和成骨誘導(dǎo),進行細胞鑒定。取第五代的ADSCs,分為對照組和Shh（100ng/ml）和三種不同濃度的Activin A（25ng/mL,50ng/mL,75ng/mL）作用組。在誘導(dǎo)的7d、14d、21d應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）分別檢測甲狀旁腺素（PTH）的含量,蛋白免疫印跡（Western blot）檢測細胞中CaSR、PTH和Gcm2的蛋白表達量,PCR檢測分化細胞中CaSR、PTH和Gcm2的mRNA表達量。結(jié)果:成脂誘導(dǎo)和成骨誘導(dǎo)分化成功,證明為ADSCs。ADSCs在Shh和Activin A的作用下,培養(yǎng)液中檢測出PTH,并存在誘導(dǎo)濃度和時間依賴性。以Shh 100ng/ml和Activin A... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

ADSCs成脂誘導(dǎo)后脂滴形成

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文14實驗一結(jié)果1鑒定大鼠ADSCs成脂誘導(dǎo)將已經(jīng)配制好的成脂誘導(dǎo)液加入到ADSCs內(nèi)，反應(yīng)7d（圖1A）、14d（圖1B）、21d（圖1C）后，利用油紅O對反應(yīng)后的ADSCs進行染色，然后將其倒置于顯微鏡下，利用顯微鏡對脂滴形成的過程進行觀察。我們發(fā)現(xiàn)，在整個觀察過程中，細胞中脂滴數(shù)量不斷增長，該結(jié)果表明細胞成脂誘導(dǎo)成功。圖1ADSCs成脂誘導(dǎo)后脂滴形成2大鼠ADSCs成骨誘導(dǎo)的鑒定ADSCs加入成骨誘導(dǎo)液分別誘導(dǎo)7d（圖2A）、14d（圖2B）、21d（圖2C）后，將反應(yīng)后的ADSCs利用茜素紅進行染色，然后將其倒置于顯微鏡下，通過顯微鏡對細胞中鈣的沉積過程觀察，發(fā)現(xiàn)整個觀察過程中鈣鹽沉積越來越多，表明細胞成骨誘導(dǎo)成功。圖2ADSCs成骨誘導(dǎo)后鈣鹽沉積形成

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文21實驗二結(jié)果1ADSCs向甲狀旁腺樣細胞分化形態(tài)學(xué)的變化隨著誘導(dǎo)劑濃度的增加和作用時間的延長，細胞數(shù)量明顯增加，細胞呈長梭型，形態(tài)均已，呈魚群樣排列，方向性明顯（圖1-1，圖1-2，圖1-3）圖1-1不同濃度Shh和ActivinA處理ADSCs7d后細胞形態(tài)變化

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3394895