目的:關(guān)節(jié)軟骨損傷嚴重影響著人們的生活質(zhì)量,同時骨關(guān)節(jié)軟骨疾病開始趨于年輕化。目前臨床上治療此類疾病的方法主要包括自體或同種異體軟骨移植,但給供區(qū)造成新的損傷,同時供體來源有限,不能滿足臨床需求。本研究在相關(guān)文獻報道基礎(chǔ)上,利用天然材料絲素和膠原蛋白,冷凍干燥法來制備復合支架,TGF-β1聯(lián)合IGF-1誘導BMSCs作為種子細胞,構(gòu)建組織工程化培養(yǎng)模型,在微環(huán)境下誘導BMSCs向軟骨細胞分化。方法:1.采用密度梯度離心法分離大鼠BMSCs,體外培養(yǎng)擴增并觀察其特征。2.軟骨方向誘導鑒定:取第三代BMSCs,加入軟骨誘導液,2周后分別行甲苯胺藍和番紅素O染色。3.絲素蛋白/膠原蛋白組織工程支架的制備:以桑蠶絲和牛腱為原料制備絲素蛋白和膠原蛋白,將二者溶液按不同比例進行共混,冷凍,真空干燥,制備復合支架（編號1,2,3組）。檢測每組支架材料的孔隙率、吸水率、力學性能、孔徑。取第三代骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）接種支架,培養(yǎng)14天,利用噻唑藍（MTT）、蘇木素-伊紅（HE）染色、掃描電鏡（SEM）觀察每組支架內(nèi)部結(jié)構(gòu)及細胞在內(nèi)部的生長增殖。4.組織工程化培養(yǎng)模型的建立:構(gòu)建組織工程化培養(yǎng)模... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫
前言
材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 實驗材料
        1.1.3 實驗試劑
        1.1.4 實驗設(shè)備
    1.2 大鼠BMSCs分化潛能的鑒定方法
        1.2.1 干細胞提取與培養(yǎng)
        1.2.2 多聚賴氨酸防脫片的制備
        1.2.3 軟骨方向鑒定
        1.2.4 甲苯胺藍染色
        1.2.5 番紅素O染色
    1.3 絲素蛋白復合膠原蛋白支架的制備
        1.3.1 絲素蛋白制備
        1.3.2 膠原蛋白制備
        1.3.3 制備支架
    1.4 復合支架性能檢測
        1.4.1 孔隙率測定
        1.4.2 吸水膨脹率測
        1.4.3 力學性能檢測
        1.4.4 孔徑測定
        1.4.5MTT檢測細胞相容性
        1.4.6 HE染色觀察
        1.4.7 掃描電鏡觀察
    1.5 阿利新藍法測定培養(yǎng)液上清中糖胺多糖的含量
        1.5.1 組織工程化培養(yǎng)模型的建立
        1.5.2 實驗原理
        1.5.3 實驗方法
    1.6 免疫組化檢測Ⅱ型膠原
        1.6.1 實驗原理
        1.6.2.實驗方法
    1.7 統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    1.8
        1.8.1 大鼠BMSCs的提取
        1.8.2 大鼠BMSCs的原代培養(yǎng)與擴增
        1.8.3 大鼠BMSCs的軟骨分化潛能的鑒定
        1.8.4 SF/ COL組織工程支架的制備及其理化性質(zhì)的檢測
        1.8.5 組織工程化培養(yǎng)模型成軟骨能力的檢測
            1.8.5.1 組織工程化培養(yǎng)模型的的建立
            1.8.5.2 誘導后培養(yǎng)模型分泌糖胺多糖含量的變化
            1.8.5.3 誘導培養(yǎng)模型免疫組織化鑒定
附圖
附表
討論
    1.9
        1.9.1 種子細胞的來源、分離及其穩(wěn)定擴增
        1.9.2 支架材料的選擇及制備
            1.9.2.1 支架材料的選擇
            1.9.2.2 支架制備方法
            1.9.2.3 支架的理化性質(zhì)
            1.9.2.4 支架的細胞相容性
        1.9.3 生長因子及其作用方式的選擇
            1.9.3.1 生長因子的選擇
            1.9.3.2 生長因子作用方式的選擇
        1.9.4 軟骨分化程度指標及其意義
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 軟骨組織工程研究進展
    綜述參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]外源性TGF-β1和IGF-1誘導骨髓間充質(zhì)干細胞定向分化軟骨細胞的實驗研究[D]. 譚榮邦.揚州大學 2013
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本文編號：3374833