[目的]建立PC12細胞體外培養(yǎng)方法及氧糖剝奪/復糖復氧（oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R）損傷模型,研究低溫對體外培養(yǎng)的PC12細胞氧糖剝奪/復糖復氧損傷的保護作用及相關(guān)機制。[方法]采用PC12細胞株進行細胞培養(yǎng),細胞傳代后,取第二代,生長至第四天的PC12細胞進行實驗。采用連二亞硫酸鈉（Na2S2O4）,聯(lián)合無糖DMEM（Dulbecco minimum essential medium杜爾伯科極限必需培養(yǎng)基）的方法建立PC12細胞的OGD/R（oxygen glucose deprivation and reperfusion）損傷模型,通過噻唑藍（Thiazolyl Blue Tetrazol ium Bromide MTT）染色法和檢測乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,LDH）的釋放量來評價PC1 2細胞受損傷程度。將體外培養(yǎng)的PC12細胞分為6組：正常對照組、氧糖剝奪/復糖復氧常溫組、氧糖剝奪/復糖復氧32℃組（OGD/R+32℃）.氧糖剝奪/復糖復氧32℃給藥組（OGD/R+32℃+L... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．正常組、ＯＧＤ／Ｒ組細胞形態(tài)學變化

３．１２?ＭＴＴ?分析：??０ＧＤ／Ｒ造模組細胞百分活力與正常對照組ＰＣ１２細胞的百分活力相比下降了??７８．８３％，如圖３Ａ所示，且兩組比較差異有統(tǒng)計學意義，說明０ＧＤ／Ｒ造模成功。??３．１３?ＬＤＨ釋放量的檢測Ｓ??０ＧＤ／Ｒ造模組ＰＣ１２細胞的ＬＤＨ百分釋放量約為正常對照組２．０倍如圖３Ｂ所??示，且兩者比較差異有統(tǒng)計學意義，說明０ＧＤ／Ｒ造模成功。??細胞活力（％）?Ｉ?ＬＤＨ釋放量（％）??２５０??１２０?．?２００；?扇??１００?ｊ?Ａ?巧叫?響??８０?Ｔ?麵’??■?，?１?蘭匿??０?＇Ｔ????＾???Ｑ?．．．?????正常對照巧?ＯＧＤ／燭?正常對照坦ＯＧＤ／Ｒ組??Ａ?Ｂ??圖３．?ＯＧＤ／Ｒ造模后，ＰＣ１２細胞細胞活力的變化。（Ａ）?ＭＴＴ分析；（Ｂ）?ＬＤＨ釋??放量的檢測。??正常對照組用完全培養(yǎng)基艇育４?ｈ，０ＧＤ／Ｒ造模組用含２?ｍＭ連二亞硫酸鑰的無??糖ＤＭＥＭ解育４ｈ，然后換用完全培養(yǎng)基繼續(xù)在Ｃ０２培養(yǎng)箱（３７?’Ｃ，５?％?Ｃ〇２，?９５??１５??

在倒置顯微鏡下觀察ＰＣ１２細胞的形態(tài)學變化，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，??對照組未經(jīng)過氧糖剝奪／復糖復氧處理的細胞貼壁良好，多成楠圓形，細胞形??態(tài)飽滿，可見突觸生長，一些細胞交織成網(wǎng)（圖４Ａ）。３７°Ｃ下氧糖剝奪處理４??小時，復糖復氧２４小時后，顯微鏡下可見細胞胞體皺縮，細胞變形，立體感??消失（圖４Ｂ）。低濕處理的０ＧＤ／Ｒ組，細胞形態(tài)學上的變化較未經(jīng)低溫處理??的０ＧＤ／Ｒ組的細胞明顯減少，可見少量細胞皺縮，胞體變圓，立體感消失。??０抑／Ｒ＋２７°Ｃ?＋?ＬＹ２９４００２?組和?０ＧＤ／Ｒ＋３２‘Ｃ?＋?ＬＹ２９４００２?組細胞胞體皺縮，細胞??胞體變圓，失去光澤，變形，立體感消失。??矜妒等??繞擴３??Ａ．?正常對照組（１００倍）?Ｂ．?０ＧＤ／Ｒ?３７Ｃ組（１００倍）??ＨＢ??２４??

【參考文獻】：
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本文編號：3346324