研究目的胰島素抵抗是圍術(shù)期常見的一種并發(fā)癥,臨床研究表明右美托咪定可以穩(wěn)定圍術(shù)期血糖并降低胰島素抵抗的發(fā)生率,然而其分子機制尚未完全明確。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是胰島素抵抗發(fā)生的重要機制之一,因此,本實驗將研究右美托咪定對肝細(xì)胞胰島素抵抗的影響,并探討該影響是否通過降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而實現(xiàn)。研究方法本實驗選用高濃度胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞和LO2細(xì)胞建立肝細(xì)胞胰島素抵抗模型。HepG2細(xì)胞和LO2細(xì)胞分別用含不同濃度胰島素的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同時間,應(yīng)用CCK8及葡萄糖濃度測定試劑盒選定制備模型的最佳胰島素濃度及作用時間,即既不抑制細(xì)胞活性,又可以產(chǎn)生最大胰島素抵抗效應(yīng)。已成功誘導(dǎo)胰島素抵抗的肝細(xì)胞用含不同濃度右美托咪定的培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時,用葡萄糖檢測試劑盒檢測上清中的葡萄糖濃度,觀察右美托咪定對胰島素抵抗的影響。我們在m RNA水平和蛋白水平檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白結(jié)合免疫球蛋白（binding immunoglobulin protein,BIP）及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白29（endoplasmic reticulum protein 29,ERp29）,此外,用蛋白免疫印跡的方法檢測胰島素作用通路中的重要蛋白... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1含不同終濃度胰島素的培養(yǎng)液對HepG2細(xì)胞活性及葡萄糖消耗量的影響（mean±SD,n=5，*P<0.05）（a.培養(yǎng)24h后的活性檢測；b.培養(yǎng)48h后的活性

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文實驗結(jié)果19圖3.1.1含不同終濃度胰島素的培養(yǎng)液對HepG2細(xì)胞活性及葡萄糖消耗量的影響（mean±SD,n=5，*P<0.05）（a.培養(yǎng)24h后的活性檢測；b.培養(yǎng)48h后的活性檢測；c.培養(yǎng)72h后的活性檢測；d.培養(yǎng)24h后的葡萄糖消耗量檢測；e.培養(yǎng)48h后的葡萄糖消耗量檢測；f.培養(yǎng)72h后的葡萄糖消耗量檢測。與空白組相比，20μg/ml組培養(yǎng)24h細(xì)胞活性出現(xiàn)顯著性降低，*P<0.05；與同組內(nèi)葡萄糖消耗量最高組相比，10μg/ml組培養(yǎng)48h葡萄糖消耗量出現(xiàn)顯著性降低，*P<0.05）圖3.1.2含不同終濃度胰島素的培養(yǎng)液對LO2細(xì)胞活性及葡萄糖消耗量的影響

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文實驗結(jié)果22圖3.4.1右美托咪定對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白的影響（mean±SD,n=3，#P<0.05，*P<0.05）（a和c.HepG2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白的表達；e.HepG2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白mRNA水平的表達；b和d.LO2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白的表達；f.LO2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白mRNA水平的表達。與N組相比，IR組的BIP和ERp29的蛋白及mRNA水平均顯著性升高，#P<0.05；與IR組相比，DEX各組的BIP和ERp29的蛋白及mRNA水平均顯著性降低，*P<0.05）3.5右美托咪定對肝細(xì)胞胰島素作用通路蛋白的影響既往研究證實，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激會影響胰島素作用通路IRS-1/PI3K/Akt相關(guān)蛋白的表達，最終影響胰島素抵抗的發(fā)生，因此我們選擇了該信號通路的下游蛋白Akt作為研究對象。肝細(xì)胞在用高濃度胰島素處理發(fā)生胰島素抵抗后，Akt在Ser473位點的磷酸化較正常組顯著性降低（P<0.05，圖3.5.1），該位點的磷酸化水平影響著后續(xù)信號通路的表達，這也進一步驗證了我們的細(xì)胞模型是成功的。而右美

【參考文獻】：
期刊論文
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