目的探討KLD-12多肽復(fù)合重組人BMP-2（recombinant human BMP-2,rhBMP-2）誘導(dǎo)兔BMSCs成骨活性的影響。方法取3月齡新西蘭大白兔骨髓,采用密度梯度法分離培養(yǎng)BMSCs。取第3代BMSCs分別采用KLD-12多肽/rhBMP-2凝膠三維培養(yǎng)（實(shí)驗(yàn)組）和KLD-12多肽凝膠培養(yǎng)（對(duì)照組）。培養(yǎng)7 d倒置相差顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在凝膠內(nèi)的形態(tài);3、7、10、14、21 d檢測(cè)兩組細(xì)胞培養(yǎng)基中ALP及骨鈣蛋白含量;培養(yǎng)14 d兩組行Ⅰ型膠原免疫熒光染色觀察,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原和骨鈣蛋白基因相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果倒置相差顯微鏡下觀察,培養(yǎng)7 d實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組凝膠內(nèi)BMSCs呈圓形,分布均勻。兩組培養(yǎng)3、7 d時(shí)ALP表達(dá)量及骨鈣蛋白含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,10²1 d實(shí)驗(yàn)組以上指標(biāo)均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。培養(yǎng)14 d,激光共聚焦顯微鏡觀察示,實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型膠原免疫熒光染色陽(yáng)性,且熒光強(qiáng)度較對(duì)照組高;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型膠原、骨鈣蛋白基因相對(duì)表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2016,30(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

培養(yǎng)7d凝膠內(nèi)BMSCs觀察（倒置相差顯微鏡×40）

，還有待進(jìn)一步研究。目前，骨組織工程研究中采用的細(xì)胞支架可分為3類，分別為鈣磷陶瓷、天然高分子材料、人工合成的高分子多聚物。它們單獨(dú)使用時(shí)均存在不同缺點(diǎn)，如可塑性差、生物降解速度慢、可能引起免疫排斥反應(yīng)及細(xì)胞吸附力差等。KLD-12多肽是由氨基酸構(gòu)成的多肽結(jié)構(gòu)，其親水基和疏水基交替排列，緊密結(jié)合成堅(jiān)固的分子結(jié)構(gòu)，被激發(fā)的KLD-12多肽自組裝后能夠緊密結(jié)合并維持一定形態(tài)，多肽表面具有一定彈性，內(nèi)部多孔特性能夠促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)圖1BMSCs形態(tài)觀察（倒置相差顯微鏡×10）a原代培養(yǎng)14db第3代細(xì)胞圖2培養(yǎng)7d凝膠內(nèi)BMSCs觀察（倒置相差顯微鏡×40）a實(shí)驗(yàn)組b對(duì)照組圖3各時(shí)間點(diǎn)兩組細(xì)胞培養(yǎng)基中ALP表達(dá)量圖4各時(shí)間點(diǎn)兩組細(xì)胞培養(yǎng)基中骨鈣蛋白含量圖5培養(yǎng)14dⅠ型膠原免疫熒光染色觀察（激光共聚焦顯微鏡×200）a對(duì)照組b實(shí)驗(yàn)組Fig.1MorphologicalobservationofBMSCs(Invertedphasecontrastmicroscope×10)aPrimarycellsat14daysbThethirdgenerationcellsFig.2ObservationofBMSCsinthegelat7days(Invertedphasecontrastmicroscope×40)aExperimentalgroupbControlgroupFig.3ALPexpressionincellculturemediumof2groupsatdierenttimepointsFig.4Osteocalcincontentincellculturemediumof2groupsatdierenttimepointsFig.5ObservationofcollagentypeIimmunouorescencestainingat14days(Laserscanningconfocalmicroscope×200)aControlgroupbExperimentalgroup

，還有待進(jìn)一步研究。目前，骨組織工程研究中采用的細(xì)胞支架可分為3類，分別為鈣磷陶瓷、天然高分子材料、人工合成的高分子多聚物。它們單獨(dú)使用時(shí)均存在不同缺點(diǎn)，如可塑性差、生物降解速度慢、可能引起免疫排斥反應(yīng)及細(xì)胞吸附力差等。KLD-12多肽是由氨基酸構(gòu)成的多肽結(jié)構(gòu)，其親水基和疏水基交替排列，緊密結(jié)合成堅(jiān)固的分子結(jié)構(gòu)，被激發(fā)的KLD-12多肽自組裝后能夠緊密結(jié)合并維持一定形態(tài)，多肽表面具有一定彈性，內(nèi)部多孔特性能夠促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)圖1BMSCs形態(tài)觀察（倒置相差顯微鏡×10）a原代培養(yǎng)14db第3代細(xì)胞圖2培養(yǎng)7d凝膠內(nèi)BMSCs觀察（倒置相差顯微鏡×40）a實(shí)驗(yàn)組b對(duì)照組圖3各時(shí)間點(diǎn)兩組細(xì)胞培養(yǎng)基中ALP表達(dá)量圖4各時(shí)間點(diǎn)兩組細(xì)胞培養(yǎng)基中骨鈣蛋白含量圖5培養(yǎng)14dⅠ型膠原免疫熒光染色觀察（激光共聚焦顯微鏡×200）a對(duì)照組b實(shí)驗(yàn)組Fig.1MorphologicalobservationofBMSCs(Invertedphasecontrastmicroscope×10)aPrimarycellsat14daysbThethirdgenerationcellsFig.2ObservationofBMSCsinthegelat7days(Invertedphasecontrastmicroscope×40)aExperimentalgroupbControlgroupFig.3ALPexpressionincellculturemediumof2groupsatdierenttimepointsFig.4Osteocalcincontentincellculturemediumof2groupsatdierenttimepointsFig.5ObservationofcollagentypeIimmunouorescencestainingat14days(Laserscanningconfocalmicroscope×200)aControlgroupbExperimentalgroup


本文編號(hào)：3262874