目的 探討乳鐵蛋白（LF）對白介素-1β（IL-1β）誘導人骨關節(jié)炎（OA）滑膜成纖維細胞中基質金屬蛋白酶（MMPs）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）產生的影響。方法 分離并培養(yǎng)人OA滑膜成纖維細胞,取3～4代的細胞進行實驗,應用細胞免疫熒光技術來鑒定細胞性質,采用CCK8法檢測不同濃度乳鐵蛋白對OA滑膜成纖維細胞活性的影響,用實時定量PCR（RT-PCR）和Western blot法檢測乳鐵蛋白對IL-1β誘導人OA滑膜成纖維細胞中MMPs和COX-2表達的影響,用ELISA法測量PGE2表達的影響。結果 CCK8結果顯示,在一定濃度范圍內LF對滑膜成纖維細胞活性無明顯影響,差異無統(tǒng)計學意義;RT-PCR、Western blot和ELISA結果提示LF對IL-1β誘導人OA滑膜成纖維細胞中MMPs、COX-2、PGE2產生具有抑制作用。結論 LF能夠抑制IL-1β誘導人OA滑膜成纖維細胞中MMPs、COX-2、PGE2的表達,對OA具有保護作用。 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2019,54(08)北大核心

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滑膜成纖維細胞A:原代細胞×100;B:第三代細胞×1002．2滑膜成纖維細胞的鑒定根據(jù)成纖維細胞特

胞核呈藍色，證明所培養(yǎng)細胞為成纖維細胞，見圖2。圖2滑膜成纖維細胞免疫熒光鑒定結果A:多聚甲醛固定的普通白光×100;B:DAPI熒光染色×400;C:Vimentin蛋白免疫熒光×400;D:B、C組合圖×4002．3CCK8檢測LF對FLS活性的影響CCK8結果顯示:不同濃度的LF(10、50、100、200、400μg/ml)對FLS活性與空白對照組比較，各組之間均無明顯差異(F=0.84，P＞0.05)，見圖3。表明在一定濃度范圍內LF(0～400μg/ml)不影響FLS的活性。圖3LF對FLS活性的影響2．4LF對IL-1β誘導人OA滑膜成纖維細胞MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的影響ＲT-PCＲ結果提示，與空白對照組比較，IL-1β誘導組FLS中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表達有顯著差異(P＜0.01)，IL-1β誘導組與IL-1β+LF組(200μg/ml)比較顯示，LF對IL-1β導致的滑膜成纖維細胞中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。組間比較差異有統(tǒng)計學意義(FMMP1=21.05，F(xiàn)MMP13=317.1，F(xiàn)COX-2=74.59，P＜0.01，見圖4。圖4MMP1、MMP13、COX-2mＲNA在FLS中的表達與空白對照組比較:＊＊P＜0.01;與IL-1β誘導組比較:##P＜0.012．5LF對IL-1β誘導人OA滑膜成纖維細胞MMP1、MMP13、COX-2蛋白水平表達的影響用WB技術測定結果提示:IL-1β(10ng/ml)誘導組與空白對照組比較，IL-1β組中MMP1、MMP13、COX-2蛋白的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，而IL-1β安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)·1021·

?纖維細胞MMPs、COX-2、PGE2表達的影響應用Westernblot和ＲT-PCＲ法分別測量按上述方法處理的細胞中的MMPs、COX-2蛋白和mＲNA表達水平，用ELISA法測量PGE2表達水平。結果提示:與空白對照組比較，IL-1β誘導組中MMPs、COX-2、PGE2的表達明顯差異，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與IL-1β誘導組相比，在一定濃度范圍內，LF對IL-1β誘導人OA滑膜成纖維細胞MMPs、COX-2、PGE2的表達呈劑量依賴性，差異有統(tǒng)計學意義(F=3.625，P＜0.05)。見圖7。圖6PGE2在細胞上清液中表達情況與空白對照組比較:＊＊P＜0.01;IL-1β誘導組比較:##P＜0.013討論OA是最普遍的關節(jié)炎疾病，是導致殘疾的主要原因，其主要特征在于關節(jié)軟骨的組成、結構和功能的顯著改變，然而OA病變不只是軟骨的病變，還有關節(jié)其他組織病變，如滑膜、脂肪墊、軟骨下骨以及半月板和韌帶等細胞和結構的變化，其中滑膜病·2021·安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3261866