目的 探討乳鐵蛋白（LF）對(duì)白介素-1β（IL-1β）誘導(dǎo)人骨關(guān)節(jié)炎（OA）滑膜成纖維細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）產(chǎn)生的影響。方法 分離并培養(yǎng)人OA滑膜成纖維細(xì)胞,取3～4代的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)來(lái)鑒定細(xì)胞性質(zhì),采用CCK8法檢測(cè)不同濃度乳鐵蛋白對(duì)OA滑膜成纖維細(xì)胞活性的影響,用實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）和Western blot法檢測(cè)乳鐵蛋白對(duì)IL-1β誘導(dǎo)人OA滑膜成纖維細(xì)胞中MMPs和COX-2表達(dá)的影響,用ELISA法測(cè)量PGE2表達(dá)的影響。結(jié)果 CCK8結(jié)果顯示,在一定濃度范圍內(nèi)LF對(duì)滑膜成纖維細(xì)胞活性無(wú)明顯影響,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;RT-PCR、Western blot和ELISA結(jié)果提示LF對(duì)IL-1β誘導(dǎo)人OA滑膜成纖維細(xì)胞中MMPs、COX-2、PGE2產(chǎn)生具有抑制作用。結(jié)論 LF能夠抑制IL-1β誘導(dǎo)人OA滑膜成纖維細(xì)胞中MMPs、COX-2、PGE2的表達(dá),對(duì)OA具有保護(hù)作用。 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,54(08)北大核心

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滑膜成纖維細(xì)胞A:原代細(xì)胞×100;B:第三代細(xì)胞×1002．2滑膜成纖維細(xì)胞的鑒定根據(jù)成纖維細(xì)胞特

胞核呈藍(lán)色，證明所培養(yǎng)細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，見(jiàn)圖2。圖2滑膜成纖維細(xì)胞免疫熒光鑒定結(jié)果A:多聚甲醛固定的普通白光×100;B:DAPI熒光染色×400;C:Vimentin蛋白免疫熒光×400;D:B、C組合圖×4002．3CCK8檢測(cè)LF對(duì)FLS活性的影響CCK8結(jié)果顯示:不同濃度的LF(10、50、100、200、400μg/ml)對(duì)FLS活性與空白對(duì)照組比較，各組之間均無(wú)明顯差異(F=0.84，P＞0.05)，見(jiàn)圖3。表明在一定濃度范圍內(nèi)LF(0～400μg/ml)不影響FLS的活性。圖3LF對(duì)FLS活性的影響2．4LF對(duì)IL-1β誘導(dǎo)人OA滑膜成纖維細(xì)胞MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的影響ＲT-PCＲ結(jié)果提示，與空白對(duì)照組比較，IL-1β誘導(dǎo)組FLS中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表達(dá)有顯著差異(P＜0.01)，IL-1β誘導(dǎo)組與IL-1β+LF組(200μg/ml)比較顯示，LF對(duì)IL-1β導(dǎo)致的滑膜成纖維細(xì)胞中MMP1、MMP13、COX-2mＲNA的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FMMP1=21.05，F(xiàn)MMP13=317.1，F(xiàn)COX-2=74.59，P＜0.01，見(jiàn)圖4。圖4MMP1、MMP13、COX-2mＲNA在FLS中的表達(dá)與空白對(duì)照組比較:＊＊P＜0.01;與IL-1β誘導(dǎo)組比較:##P＜0.012．5LF對(duì)IL-1β誘導(dǎo)人OA滑膜成纖維細(xì)胞MMP1、MMP13、COX-2蛋白水平表達(dá)的影響用WB技術(shù)測(cè)定結(jié)果提示:IL-1β(10ng/ml)誘導(dǎo)組與空白對(duì)照組比較，IL-1β組中MMP1、MMP13、COX-2蛋白的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而IL-1β安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)·1021·

?纖維細(xì)胞MMPs、COX-2、PGE2表達(dá)的影響應(yīng)用Westernblot和ＲT-PCＲ法分別測(cè)量按上述方法處理的細(xì)胞中的MMPs、COX-2蛋白和mＲNA表達(dá)水平，用ELISA法測(cè)量PGE2表達(dá)水平。結(jié)果提示:與空白對(duì)照組比較，IL-1β誘導(dǎo)組中MMPs、COX-2、PGE2的表達(dá)明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與IL-1β誘導(dǎo)組相比，在一定濃度范圍內(nèi)，LF對(duì)IL-1β誘導(dǎo)人OA滑膜成纖維細(xì)胞MMPs、COX-2、PGE2的表達(dá)呈劑量依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.625，P＜0.05)。見(jiàn)圖7。圖6PGE2在細(xì)胞上清液中表達(dá)情況與空白對(duì)照組比較:＊＊P＜0.01;IL-1β誘導(dǎo)組比較:##P＜0.013討論OA是最普遍的關(guān)節(jié)炎疾病，是導(dǎo)致殘疾的主要原因，其主要特征在于關(guān)節(jié)軟骨的組成、結(jié)構(gòu)和功能的顯著改變，然而OA病變不只是軟骨的病變，還有關(guān)節(jié)其他組織病變，如滑膜、脂肪墊、軟骨下骨以及半月板和韌帶等細(xì)胞和結(jié)構(gòu)的變化，其中滑膜病·2021·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2019Aug;54(8)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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