背景與目的:EphA7是在機體正常功能活動中起著關(guān)鍵影響的膜蛋白,其經(jīng)常發(fā)揮作用的場所是在細(xì)胞膜,但它在骨肉瘤中起著何種作用,還未被進行相關(guān)研究。因此本實驗采取測定45例患者的骨肉瘤組織中EphA7的含量情況,并且通過相關(guān)的方法去探究EphA7是否對人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的一些生物學(xué)作用產(chǎn)生影響。從而了解EphA7蛋白在骨肉瘤中所起的作用。方法:將45例骨肉瘤病人的骨肉瘤組織和對應(yīng)的癌旁正常組織分別進行收集,然后放在液氮中儲存。培養(yǎng)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞,按照siRNA Reagent System試劑盒說明去轉(zhuǎn)染人骨肉瘤MG-63細(xì)胞,并分成siRNA-EphA7組（EphA7-siRNA轉(zhuǎn)染）、siRNA-Control組（陰性對照siRNA轉(zhuǎn)染）和空白組（未轉(zhuǎn)染）。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）去測定組織中EphA7的mRNA表達情況,用蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）去測定細(xì)胞中EphA7的蛋白表達情況。采用細(xì)胞計數(shù)試劑盒（cel... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨肉瘤組織與癌旁正常組織中EphA7的mRNA表達Figure3-1mRNAexpressionsofEphA7inosteosarcomaandadjacentnormaltissues

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文EphA7在骨肉瘤中的表達及對MG-63細(xì)胞生物學(xué)作用的研究18圖3-2骨肉瘤組織及癌旁正常組織中EphA7的蛋白水平Figure3-2ProteinlevelofEphA7inosteosarcomaandadjacentnormaltissuesA:Osteosarcomatissue;B:Adjacentnormaltissues;*:P<0.05,comparedwithadjacentnormaltissues3.3轉(zhuǎn)染后人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的熒光表達采用熒光顯微鏡對轉(zhuǎn)染siRNA-EphA7、siRNA-Control，以及未轉(zhuǎn)染的MG-63細(xì)胞中的熒光表達情況進行觀測。因為siRNA攜帶有綠色熒光標(biāo)記基因，所以轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞會呈現(xiàn)出綠色熒光。通過觀察可以發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染siRNA-EphA7、siRNA-Control的MG-63細(xì)胞中表現(xiàn)出綠色的熒光，證明轉(zhuǎn)染成功，而未轉(zhuǎn)染的MG-63細(xì)胞中無綠色熒光。圖3-3熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后的人骨肉瘤MG-63細(xì)胞熒光表達情況Figure3-3FluorescenceMicroscopyObservationofFluorescenceExpressionofTransfectedHumanOsteosarcomaMG-63CellsA:siRNA-EphA7group;B:siRNA-Controlgroup;C:Blankgroup

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文EphA7在骨肉瘤中的表達及對MG-63細(xì)胞生物學(xué)作用的研究18圖3-2骨肉瘤組織及癌旁正常組織中EphA7的蛋白水平Figure3-2ProteinlevelofEphA7inosteosarcomaandadjacentnormaltissuesA:Osteosarcomatissue;B:Adjacentnormaltissues;*:P<0.05,comparedwithadjacentnormaltissues3.3轉(zhuǎn)染后人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的熒光表達采用熒光顯微鏡對轉(zhuǎn)染siRNA-EphA7、siRNA-Control，以及未轉(zhuǎn)染的MG-63細(xì)胞中的熒光表達情況進行觀測。因為siRNA攜帶有綠色熒光標(biāo)記基因，所以轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞會呈現(xiàn)出綠色熒光。通過觀察可以發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染siRNA-EphA7、siRNA-Control的MG-63細(xì)胞中表現(xiàn)出綠色的熒光，證明轉(zhuǎn)染成功，而未轉(zhuǎn)染的MG-63細(xì)胞中無綠色熒光。圖3-3熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后的人骨肉瘤MG-63細(xì)胞熒光表達情況Figure3-3FluorescenceMicroscopyObservationofFluorescenceExpressionofTransfectedHumanOsteosarcomaMG-63CellsA:siRNA-EphA7group;B:siRNA-Controlgroup;C:Blankgroup

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Eph/ephrin與中樞神經(jīng)可塑性[J]. 余劍,曾進勝.  中國臨床康復(fù). 2002(21)



本文編號：3146989