本文關鍵詞：兩例嬰兒惡性型石骨癥病人的臨床和遺傳研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：石骨癥是由于破骨細胞的功能障礙引起的一組異質性疾病。根據臨床表型,石骨癥可分為臨床表型最嚴重的嬰兒惡性型、臨床表型最輕的常染色體顯性型和臨床表型介于兩者之間的中間型。嬰兒惡性型石骨癥是一種致命的疾病,患者壽命常常小于3歲。目前,已知有12個基因的突變可引起石骨癥,這其中,TCIRG1和CLCN7是最常見的致病基因,CLCN7基因的致病方式可以為常染色體隱性或常染色體顯性,但TCIRG1基因一般只在純合突變或者復合雜合突變時才致病。目前國外只有6例TCIRG1基因雜合性改變也致石骨癥的報道,而我國無此類報道。本研究對兩例嬰兒惡性型石骨癥患者進行臨床和遺傳研究,并跟蹤隨訪4-5年。病人1和病人2的發(fā)病年齡分別為7個月和2歲。表現(xiàn)為全身骨密度增高,“夾心餅”脊椎、“骨中骨”盆骨、“燒瓶樣”長骨等特征性的X線片表現(xiàn),有造血功能障礙、肝脾腫大、神經退行性變等并發(fā)癥,因此被確診。值得一提的是,病人2的壽命比一般嬰兒惡性型石骨癥的病人長,他最后一次復診的年齡為7歲。抽提患者及其父母的基因組DNA,設計覆蓋TCIRG1和CLCN7基因外顯子及其外顯子-內含子交界區(qū)域的引物,進行PCR擴增,Sanger測序PCR產物,分析測序結果。用生物信息學的方法分析、預測致病突變的突變效應。對于家系2,我們用TCIRG1基因附近的微衛(wèi)星標記和雜合度較高的SNP位點構建患者及其父母的單倍型;我們也用染色體微陣列分析技術檢測基因組的拷貝數(shù)目變異。在家系1中,我們在患兒基因組中發(fā)現(xiàn)了CLCN7基因的新的剪切位點突變c.285+1GA(IVS3+1 GA)和一個已知的錯義突變c.896CT(p.Ala299Val)。突變c.285+1GA位于第三個內含子的剪接供體上,生物信息學分析預測這個突變能干擾第3和第4個外顯子的剪接,從而截斷蛋白質碳端的711個氨基酸,使突變蛋白質失去所有的功能結構域。突變c.896CT是已知突變,其致病性已明確。對患兒父母的測序結果發(fā)現(xiàn)其父親攜帶突變c.285+1GA,其母親攜帶突變c.896CT。對患兒TCIRG1基因的檢測未發(fā)現(xiàn)致病性突變。在家系2中,測序結果示患兒TCIRG1基因外顯子5內存在一個4個堿基的雜合缺失突變c.449_452del AGAG(p.Gln149Glnfs16),由于該突變的移碼效應改變了閱讀框并提前引入終止密碼子,使得基因所編碼蛋白碳端的666個氨基酸被截斷,丟失了整個ATP酶V0復合結構域。患兒的父親也攜帶有該突變。對患兒CLCN7基因的測序未發(fā)現(xiàn)致病性突變。單倍型構建結果顯示,患兒和他父親都有同一致病單倍型。對患兒及其母親的染色體微陣列分析結果顯示,他們TCIRG1及CLCN7基因的拷貝數(shù)目是正常的。我們在患兒基因組中檢測到3個拷貝數(shù)目變異,但檢索數(shù)據庫發(fā)現(xiàn)這些拷貝數(shù)目變異都不具有臨床意義。對于患者父親攜帶致病突變卻不發(fā)病這個現(xiàn)象,可以用外顯不全來解釋。本研究對兩例嬰兒惡性型石骨癥病人進行臨床和遺傳研究,共發(fā)現(xiàn)了2個新突變和1個已知突變,擴大了TCIRG1及CLCN7基因的突變譜。在家系2中,我們闡明TCIRG1基因的雜合性突變也可能引起患兒發(fā)病,這是我國首例TCIRG1基因雜合性突變可能引起嬰兒惡性型石骨癥的報道。
【關鍵詞】：石骨癥 T細胞免疫調節(jié)子1 氯離子通道蛋白7 突變 染色體微陣列分析
【學位授予單位】：中山大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R726.8
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 縮略詞表8-12
• 前言12-14
• 第一章 材料與方法14-26
• 1.1 臨床研究14-15
• 1.1.1 石骨癥診斷標準14
• 1.1.2 病例采集14
• 1.1.3 正常對照14-15
• 1.2 主要實驗儀器、試劑和耗材15-16
• 1.2.1 主要實驗儀器15-16
• 1.2.2 主要試劑和耗材16
• 1.3 實驗方法16-26
• 1.3.1 基因組DNA提取16-17
• 1.3.2 PCR反應17-20
• 1.3.3 Sanger測序20-21
• 1.3.4 生物信息學分析21
• 1.3.5 單倍型分析21-23
• 1.3.6 染色體微陣列分析23-26
• 第二章 實驗結果26-37
• 2.1 家系 126-31
• 2.1.1 臨床研究結果26-28
• 2.1.2 CLCN7基因28-31
• 2.1.3 TCIRG1基因31
• 2.2 家系 231-37
• 2.2.1 臨床研究結果31-32
• 2.2.2 TCIRG1基因32-34
• 2.2.3 CLCN7基因34-35
• 2.2.4 單倍型構建35-36
• 2.2.5 染色體微陣列分析36-37
• 第三章 討論37-40
• 第四章 結論40-41
• 參考文獻41-47
• 碩士期間所發(fā)論文47-48
• 致謝48

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本文編號：307288