發(fā)布時間：2021-03-09 03:01

　　研究背景:缺血后處理可通過激活內(nèi)源性保護通路減輕組織缺血再灌注（I/R）損傷,但是其在老年患者中是否仍存在保護作用尚存爭議。長鏈非編碼RNA（lncRNA）H19在缺血性疾病中發(fā)揮著重要作用,但是其在老化心肌中的功能尚不明確。在臨床和基礎研究中,右美托咪定具有心肌保護作用,但其在老化心肌I/R損傷中發(fā)揮的功能和機制仍待進一步研究。RNAN6-甲基腺嘌呤甲基化（N6-methyladenosine,m6A）是內(nèi)源性最為常見的RN A修飾方式。有研究表明,腫瘤細胞缺氧后會引起細胞總體的RN A m6A修飾增加,而lncRNA本身也可被m6A修飾。因此本研究將探討H19在老化心肌缺氧后處理及右美托咪定缺氧后處理中發(fā)揮的作用及機制,缺氧后處理及右美托咪定缺氧后處理對老化心肌細胞RNA m6A的修飾水平的影響,RNA m6A修飾調(diào)控基因對lncRNA H19表達調(diào)控以及其在老化心肌缺氧復氧、缺氧后處理中發(fā)揮的作用。實驗方法:分離培養(yǎng)原代心肌細胞,用分別用0g/L,5g/L,10g/L,20g/L,40g/L濃度D-半乳糖處理加速細胞衰老,使用SA-β-gal染色及衰老相關蛋白檢測衰老情況。原代正... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學院北京市

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２．尤原代細胞經(jīng)〇ｇ，?５ｇ，?１０ｇ，?２０ｇ，４０ｇ／ＬＤ－半乳糖分別處理２４ｈ，?４８ｈ，?９６ｈ，?ＣＣＫ－８檢測??

別為?Ｏｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ?和?４０ｇ／Ｌ，并分別于?２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ?后用?ＣＣＫ－８?檢??測細胞生長情況，記錄ＯＤ４５０值，每組三個復孔，計算細胞活力。結果發(fā)現(xiàn)不同Ｄ－??半乳糖濃度處理的心肌細胞后，隨干預時間及濃度的增加細胞活力下降（圖１－２?Ａ）。??Ｏｇ／Ｌ?５ｇ／Ｌ?１０ｇ／Ｌ??８０－｜????ｒｆｆｍｉ??…卜ｉ?ｉ??ｓ—?ｉ＊?ａ?■ｉｌｌ??２〇ｇ／｜＿?４０ｇ／Ｌ?Ｏｇ／Ｌ?５ｇ／Ｌ?１０ｇ／Ｌ?２０ｇ／Ｌ?４０ｇ／Ｌ??圖１－２．?Ｂ．使用ＳＡ－Ｐ－ｇａ丨對經(jīng)《ｇ，?５ｇ，?Ｉ０ｇ，?２０ｇ，?４０ｇ／Ｌ?Ｄ－半乳糖處理的原代心肌細胞進行染色，??Ｕ－算細胞染成藍色的比例．＿（Ｆ＝１（丨．５９－?／＂＝〇．（＞〇（＞６：?＞＜０．０５?ｖｓ?Ｕｇ／Ｌ?姐）。??提取的原代心肌細胞種至６孔板，使用Ｏｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ濃??度的Ｄ－半乳糖處理４８ｈ后，一部分使用ＳＡ－?Ｐ?－ｇａｌ染色，每孔選擇５個視野，統(tǒng)計染??成深藍色細胞的比例，結果顯示ｌ〇ｇ／Ｌ及２０ｇ／Ｌ時細胞衰老比例明顯增加（Ｐ＝０．０００１?），??干預濃度為４０ｇ／Ｌ時，細胞出現(xiàn)明顯凋亡和壞死，染成深藍色比例下降（圖１－２?Ｂ）。??ｍ?＿??〇?Ｔ?赫??Ｐ５３?一?一？?曬丨＿?°；?２－??－?￡?國??＞?１＿?一??ｇａｐｄｈ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?ｍｍ?１?■?ｉｉ?＾??０）?〇?＿ＥＳ＾ＳＳｌ＿＿?ｒ—Ｉ＿１１１１

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本文編號：3072133