近年的研究表明,丙泊酚不僅在動物的膿毒癥休克中有保護(hù)作用,在器官和細(xì)胞的缺血/再灌注（I/R）、氧化應(yīng)激損傷中同樣有保護(hù)作用。丙泊酚對心肌細(xì)胞和海馬細(xì)胞的保護(hù)作用就表現(xiàn)為保護(hù)心肌細(xì)胞和海馬細(xì)胞對抗I/R的自噬性細(xì)胞死亡。包括丙泊酚、七氟烷在內(nèi)的全麻藥都會上調(diào)骨骼肌的自噬行為,這種自噬現(xiàn)象在全麻過程中呈時(shí)間依賴性逐漸上調(diào),并在六小時(shí)時(shí)達(dá)到高峰,且去神經(jīng)支配與全麻狀態(tài)缺一不可。但是,關(guān)于丙泊酚發(fā)揮對自噬的促進(jìn)作用是通過何種更具體的分子機(jī)制,以及是否能夠?qū)?shí)際的臨床用藥有指導(dǎo)意義的相關(guān)研究很少。自噬是胞質(zhì)溶膠和細(xì)胞器被隔離到雙層膜的小泡中后運(yùn)送到溶酶體/空泡中降解,并使形成的大分子進(jìn)行再循環(huán)的一個(gè)過程。自噬過程發(fā)生時(shí),細(xì)胞會消化掉自身的一部分,即self-eating,這個(gè)過程初一看似乎是不利于細(xì)胞的。但事實(shí)上,如果沒有誘發(fā)因素存在,正常情況下細(xì)胞只維持較低程度的自噬以維持自穩(wěn)。而所謂的誘發(fā)因素,既有來自于細(xì)胞外的諸如外界中的營養(yǎng)成分不足、缺血、缺氧、生長因子的濃度的變化等,也有來自于細(xì)胞內(nèi)的,比如細(xì)胞內(nèi)的代謝壓力、衰老或破損的細(xì)胞器堆積、蛋白質(zhì)折疊錯誤或異常聚集等。但是在細(xì)胞存活和生長的過... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
主要英文縮寫詞表
第1章 引言
第2章 綜述
    2.1 丙泊酚的非麻醉活性
        2.1.1 丙泊酚的抗癌活性
        2.1.2 丙泊酚的神經(jīng)保護(hù)作用
        2.1.3 丙泊酚對癲癇持續(xù)狀態(tài)的作用
        2.1.4 丙泊酚對免疫調(diào)節(jié)的作用
        2.1.5 丙泊酚對血小板聚集的作用
        2.1.6 丙泊酚對器官的保護(hù)作用
        2.1.7 丙泊酚對疼痛的作用
        2.1.8 丙泊酚的遺忘效應(yīng)
        2.1.9 丙泊酚的減少嘔吐的作用
        2.1.10 丙泊酚對自噬的作用
    2.2 自噬
        2.2.1 自噬的概述
        2.2.2 自噬的調(diào)控機(jī)制
        2.2.3 自噬與活性氧簇
        2.2.4 自噬與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
第3章 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 丙泊酚對C2C12（小鼠成肌細(xì)胞）自噬的影響的研究
        1 材料方法
            1.1 細(xì)胞株
            1.2 主要試劑和儀器
                1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
                1.2.2 主要儀器
            1.3 液體試劑的配制
        2 實(shí)驗(yàn)步驟
            2.1 C2C12細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇和傳代
                2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
                2.1.2 細(xì)胞復(fù)蘇
                2.1.3 細(xì)胞傳代
                2.1.4 細(xì)胞凍存
            2.2 丙泊酚處理后細(xì)胞活性測定實(shí)驗(yàn)
                2.2.1 細(xì)胞活性測定實(shí)驗(yàn)-CCK8法（cellcountingkit-8）
                2.2.2 丙泊酚處理后的凋亡實(shí)驗(yàn)
                2.2.3 丙泊酚處理后的活性氧簇（ROS）檢測
            2.3 自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測
                2.3.1 實(shí)時(shí)定量PCR
                2.3.2 westernblot檢測自噬相關(guān)蛋白表達(dá)情況
                2.3.3 免疫熒光法檢測自噬相關(guān)蛋白表達(dá)量
            2.4 自噬抑制劑對丙泊酚促進(jìn)自噬的作用
                2.4.1 實(shí)驗(yàn)分組
                2.4.2 Westernblot方法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3、p62
                2.4.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
            2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3 結(jié)果
            3.1 丙泊酚對細(xì)胞增殖及凋亡的影響
            3.2 不同濃度丙泊酚對分化后的小鼠成肌細(xì)胞株C2C12細(xì)胞自噬的影響
            3.3 自噬抑制劑氯喹二磷酸（CQ）對丙泊酚促進(jìn)自噬的影響.
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)二 丙泊酚促進(jìn)C2C12（小鼠成肌細(xì)胞）自噬機(jī)制的研究
        1 材料方法
        2 實(shí)驗(yàn)步驟
            2.1 C2C12細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇和傳代
                2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
                2.1.2 細(xì)胞復(fù)蘇
                2.1.3 細(xì)胞傳代
                2.1.4 細(xì)胞凍存
            2.2 丙泊酚促進(jìn)自噬的信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的研究
                2.2.1 蛋白收集
                2.2.2 蛋白定量
                2.2.3 蛋白免疫印跡法
            2.3 抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對丙泊酚促進(jìn)自噬的影響的研究
                2.3.1 westernblot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白BipCHOP的表達(dá)
                2.3.2 H2-DCFDA檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧簇（ROS）水平
                2.3.3 丙泊酚對細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響及其機(jī)制的研究
            2.4 抑制活性氧簇（ROS）對丙泊酚促進(jìn)自噬的作用的影響
                2.4.1 實(shí)驗(yàn)分組
                2.4.2 H2-DCFDA檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧簇（ROS）水平
                2.4.3 westernblot檢測自噬相關(guān)蛋白
        3 結(jié)果
            3.1 丙泊酚通過AMPK-MTOR通路激活自噬
            3.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑TUDCA對丙泊酚誘導(dǎo)的自噬的相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑和自噬抑制劑對丙泊酚處理后細(xì)胞內(nèi)的ROS的影響
            3.4 ROS增加對丙泊酚促進(jìn)自噬的作用的影響
            3.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑對丙泊酚調(diào)節(jié)鈣離子水平的影響
        4 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝



本文編號：3057131