沉默COPB2基因對人三陰乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響
發(fā)布時間：2021-02-27 18:22
目的三陰乳腺癌侵襲性強,淋巴結轉移率高,五年復發(fā)率高,預后較差,缺乏相應治療靶點。近年來沉默腫瘤特異性基因的表達或研發(fā)針對腫瘤特異性基因的藥物,成為腫瘤基因治療的新方向。衣被蛋白復合體-亞基β2（coatomer protein complex,subunie beta 2,beta prime,COPB2）,在細胞內物質轉運中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn),COPB2基因在癌組織中高表達,沉默COPB2基因可致細胞周期阻滯、抑制細胞增殖、誘導細胞凋亡。本實驗的目的是研究COPB2對三陰乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響及其初步機制探討。方法1.Western blotting檢測非三陰乳腺癌MCF-7細胞和三陰乳腺癌HS-578T細胞中COPB2的表達;兩種細胞上皮間質轉化標志物表皮鈣粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、N-鈣粘蛋白（N-cadherin）的表達差異。2.MTT實驗、克隆形成實驗、Transwell實驗檢測非三陰乳腺癌MCF-7細胞和三陰乳腺癌HS-578T細胞增殖、遷移、侵襲能力的差異。3.COPB2基因的慢病毒特異性干擾載體sh-COPB2轉染人...
【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：42 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
COPB2在乳腺癌中的表達水平（A）TCGA分析COPB2mRNA在乳腺癌組織及其癌旁組織中的表達（t-test，***P<0.001）
蘭州大學碩士學位論文沉默COPB2基因對人三陰乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響18圖2HS-578T和MCF-7細胞的生物學特點（A）MTT實驗檢測24h、48h、72h、96h和120h時，MCF-7、HS-578T細胞的增殖能力（n=3，t-test，*P<0.05，***P<0.001）。（B）克隆形成實驗檢測MCF-7、HS-578T細胞的克隆形成能力，右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（C）Transwell遷移實驗檢測MCF-7、HS-578T細胞的遷移能力（×200），右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（D）Transwell侵襲實驗檢測MCF-7、HS-578T細胞的侵襲能力（×200），右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，**P<0.01）。（E）WesternBlotting檢測MCF-7和HS-578T中E-Ca、Vimentin、N-Ca蛋白表達水平，右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。3慢病毒介導的shRNA沉默HS-578T細胞中的COPB23.1熒光顯微鏡觀察HS-578T細胞感染效率HS-578T細胞的增殖、侵襲和遷移能力都強于MCF-7細胞，且HS-578T細胞中COPB2表達高于MCF-7細胞，為進一步研究COPB2與細胞增殖、侵襲和遷移能力的關系，本實驗選擇HS-578T細胞為研究對象。慢病毒包裝的COPB2shRNA感染HS-578T細胞96h后，熒光顯微鏡下觀察感染情況，轉染效率大于80%，達到預期感染效果(圖3A)。3.2Westernblotting檢測慢病毒感染細胞后COPB2的表達情況慢病毒感染HS-578T細胞96h后，Westernblotting檢測COPB2的表達情況。結果顯示，慢病毒感染以后，與Parental組相比，sh-COPB2組中COPB2蛋白水平顯著下降(P<0.01)，與sh-Control組相比，sh-COPB2組中COPB2蛋白水平顯著下降(P<0.05)(圖3B)。結果提示，慢病毒介導的shRNA能夠有效沉默HS-578T細胞中COPB2的表達?
蘭州大學碩士學位論文沉默COPB2基因對人三陰乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響19圖3慢病毒介導的shRNA沉默HS-578T細胞中的COPB2（A）熒光顯微鏡觀察HS-578T細胞中慢病毒感染效率大于80%。（B）WesternBlotting檢測慢病毒感染后HS-578T細胞COPB2蛋白表達水平，右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，*P<0.05，**P<0.01以Parental組為標準化成1.0進行定量分析）。4COPB2基因沉默對HS-578T細胞增殖的影響4.1MTT實驗檢測HS-578T細胞增殖能力慢病毒轉染后，MTT實驗檢測24h、48h、72h、96h、120h細胞的增殖能力。結果顯示，與Parental組及sh-Control組相比，48h、72h、96h、120h時，sh-COPB2組細胞增殖能力明顯降低(P<0.05，P<0.001)(圖4A)。4.2HS-578T細胞克隆形成能力慢病毒轉染后，克隆形成實驗檢測細胞的克隆形成能力，顯微鏡下計數(shù)克隆球，結果顯示，與親本細胞組及空質粒對照組相比，沉默組克隆形成能力明顯降低(P<0.001)(圖4B)。Parentalsh-Controlsh-COPB2COPB2GAPDH
【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國城市癌癥早診早治項目進展[J]. 陳萬青,李霓,石菊芳,任建松,陳宏達,李江,代敏,赫捷. 中國腫瘤. 2019(01)
[2]EpCAM,Vimentin和N-Cadherin在三陰型乳腺癌中的表達和預后意義[J]. 李新軍,馬風妹,付麗梅,付明霞,吳戈. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2017(04)
[3]乳腺癌手術治療回顧和進展[J]. 張彥收,劉運江. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2015(05)
[4]Akt/PKB信號通路調控機制的研究進展[J]. 趙學芹,黃憲章. 廣東醫(yī)學. 2009(12)
[5]N-cadherin knock-down decreases invasiveness of esophageal squamous cell carcinoma in vitro[J]. Ke Li,Wei He,Na Lin,Xin Wang,Qing-Xia Fan,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2009(06)
博士論文
[1]COPB2基因沉默通過JNK/c-Jun信號通路抑制結直腸癌細胞增殖、誘導凋亡并提高細胞對常山酮的敏感性[D]. 王燕.蘭州大學 2018
本文編號：3054621
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【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
COPB2在乳腺癌中的表達水平（A）TCGA分析COPB2mRNA在乳腺癌組織及其癌旁組織中的表達（t-test，***P<0.001）
蘭州大學碩士學位論文沉默COPB2基因對人三陰乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響18圖2HS-578T和MCF-7細胞的生物學特點（A）MTT實驗檢測24h、48h、72h、96h和120h時，MCF-7、HS-578T細胞的增殖能力（n=3，t-test，*P<0.05，***P<0.001）。（B）克隆形成實驗檢測MCF-7、HS-578T細胞的克隆形成能力，右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（C）Transwell遷移實驗檢測MCF-7、HS-578T細胞的遷移能力（×200），右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（D）Transwell侵襲實驗檢測MCF-7、HS-578T細胞的侵襲能力（×200），右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，**P<0.01）。（E）WesternBlotting檢測MCF-7和HS-578T中E-Ca、Vimentin、N-Ca蛋白表達水平，右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。3慢病毒介導的shRNA沉默HS-578T細胞中的COPB23.1熒光顯微鏡觀察HS-578T細胞感染效率HS-578T細胞的增殖、侵襲和遷移能力都強于MCF-7細胞，且HS-578T細胞中COPB2表達高于MCF-7細胞，為進一步研究COPB2與細胞增殖、侵襲和遷移能力的關系，本實驗選擇HS-578T細胞為研究對象。慢病毒包裝的COPB2shRNA感染HS-578T細胞96h后，熒光顯微鏡下觀察感染情況，轉染效率大于80%，達到預期感染效果(圖3A)。3.2Westernblotting檢測慢病毒感染細胞后COPB2的表達情況慢病毒感染HS-578T細胞96h后，Westernblotting檢測COPB2的表達情況。結果顯示，慢病毒感染以后，與Parental組相比，sh-COPB2組中COPB2蛋白水平顯著下降(P<0.01)，與sh-Control組相比，sh-COPB2組中COPB2蛋白水平顯著下降(P<0.05)(圖3B)。結果提示，慢病毒介導的shRNA能夠有效沉默HS-578T細胞中COPB2的表達?
蘭州大學碩士學位論文沉默COPB2基因對人三陰乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響19圖3慢病毒介導的shRNA沉默HS-578T細胞中的COPB2（A）熒光顯微鏡觀察HS-578T細胞中慢病毒感染效率大于80%。（B）WesternBlotting檢測慢病毒感染后HS-578T細胞COPB2蛋白表達水平，右側柱狀圖為三次獨立重復實驗定量分析（n=3，t-test，*P<0.05，**P<0.01以Parental組為標準化成1.0進行定量分析）。4COPB2基因沉默對HS-578T細胞增殖的影響4.1MTT實驗檢測HS-578T細胞增殖能力慢病毒轉染后，MTT實驗檢測24h、48h、72h、96h、120h細胞的增殖能力。結果顯示，與Parental組及sh-Control組相比，48h、72h、96h、120h時，sh-COPB2組細胞增殖能力明顯降低(P<0.05，P<0.001)(圖4A)。4.2HS-578T細胞克隆形成能力慢病毒轉染后，克隆形成實驗檢測細胞的克隆形成能力，顯微鏡下計數(shù)克隆球，結果顯示，與親本細胞組及空質粒對照組相比，沉默組克隆形成能力明顯降低(P<0.001)(圖4B)。Parentalsh-Controlsh-COPB2COPB2GAPDH
【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國城市癌癥早診早治項目進展[J]. 陳萬青,李霓,石菊芳,任建松,陳宏達,李江,代敏,赫捷. 中國腫瘤. 2019(01)
[2]EpCAM,Vimentin和N-Cadherin在三陰型乳腺癌中的表達和預后意義[J]. 李新軍,馬風妹,付麗梅,付明霞,吳戈. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2017(04)
[3]乳腺癌手術治療回顧和進展[J]. 張彥收,劉運江. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2015(05)
[4]Akt/PKB信號通路調控機制的研究進展[J]. 趙學芹,黃憲章. 廣東醫(yī)學. 2009(12)
[5]N-cadherin knock-down decreases invasiveness of esophageal squamous cell carcinoma in vitro[J]. Ke Li,Wei He,Na Lin,Xin Wang,Qing-Xia Fan,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2009(06)
博士論文
[1]COPB2基因沉默通過JNK/c-Jun信號通路抑制結直腸癌細胞增殖、誘導凋亡并提高細胞對常山酮的敏感性[D]. 王燕.蘭州大學 2018
本文編號：3054621
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