背景:A型肉毒毒素（Botulinum toxin type A,BTX-A）和透明質(zhì)酸鈉（Hyaluronic acid,HA）凝膠聯(lián)合注射治療面部年輕化的療效較單獨(dú)注射HA凝膠更好,同時(shí)發(fā)現(xiàn),BTX-A能明顯降低體內(nèi)HA凝膠的代謝率,具有顯著協(xié)同作用,但目前國內(nèi)外并無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道BTX-A降低HA凝膠代謝的相關(guān)機(jī)制,另外,在臨床操作中,因HA填充劑量過大、填充物移位、血管栓塞、皮膚組織壞死、失明等并發(fā)癥的發(fā)生率較高,需及時(shí)注射透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase,HAase）進(jìn)行溶解,但目前尚無BTX-A對HAase活性影響的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。目的:本實(shí)驗(yàn)擬初步研究BTX-A對體外HA凝膠酶降解反應(yīng)的影響,并在大鼠體內(nèi)觀察BTX-A對HA凝膠代謝的影響,進(jìn)而探討二者聯(lián)合治療協(xié)同作用的發(fā)生機(jī)制,為臨床操作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、BTX-A對體外HA凝膠酶解反應(yīng)的影響取海薇和潤百顏HA凝膠各5份,每份0.05m L,經(jīng)2%甲苯胺藍(lán)染色12h,室溫（25℃）復(fù)溫1h后,分別加入BTX-A 2.5U（2.5U/m L）、5.0U（5.0U/m L）、10.0U（10.0U/m L）、20.0... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

wistar大鼠背部注射區(qū)域標(biāo)記圖

8a后，經(jīng)脫臼法處死，尸體經(jīng)蘭州大學(xué)第二醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心統(tǒng)一處理（圖2-2）。圖2-2皮膚組織及剩余HA凝膠取材示意圖Figure2-2SchematicdrawingofskintissuesandremainingHAgela大鼠背部皮膚組織及剩余HA凝膠取材（90d）；b完整游離的剩余HA凝膠（90d）剪開皮膚組織，見HA凝膠形成完整包膜并固定于真皮下層，活動(dòng)度較小，富有彈性，從真皮組織下層可完整剝離。注射后第90d，對照組（右）剩余HA凝膠體積較BTX-A組（左）明顯減少。aSkintissueandremainingHAgelintheratback(90d);bFreeremainingHAgel(90d)Aftercuttingtheskintissue,itcanbeseenthattheHAgelformsacompleteenvelopeandisfixedtothelowerlayerofthedermis,withlessmobilityandrichelasticity.Itcanbecompletelyreleasedfromthelowerlayerofdermaltissue.Onthe90thdayafterinjection,thevolumeoftheremainingHAgelonthecontrolgroup,wassignificantlyreducedcomparedtotheBTX-Agroup.2.5.2.5檢測指標(biāo)及方法1.一般情況大鼠經(jīng)常規(guī)飼養(yǎng)7d，觀察大鼠日常行為習(xí)慣和進(jìn)食水等有無異常，注射后動(dòng)態(tài)觀察上述行為是否發(fā)生改變，觀察背部注射區(qū)域皮膚隆起情況，觀察局部毛發(fā)生長情況，有無皮膚破潰、水腫、紅斑等不良反應(yīng)發(fā)生。2.免疫組化染色檢測HYAL-1、HYAL-2的表達(dá)在各實(shí)驗(yàn)周期對大鼠背部注射區(qū)域皮膚組織進(jìn)行取材，制作石蠟切片行免疫組化染色。具體步驟如下：①石蠟切片經(jīng)脫蠟至水：依次將切片浸入二甲苯I（30min）→二甲苯II（30min）→無水乙醇I（15min）→無水乙醇II（15min）→95%乙醇I（5min）95%乙醇II（5min）→80%乙醇（5min）→75%乙醇（5min）；蒸餾水沖洗2次，PBS（PH7.4）沖洗3遍，每遍3min。LRb

13第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1BTX-A對體外HA凝膠酶解反應(yīng)的影響通過肉眼及顯微鏡（40×）觀察，海薇及潤百顏兩種產(chǎn)品形態(tài)學(xué)差異較大，在水溶液中潤百顏產(chǎn)品分布較海薇分散，其顆粒尺寸也較海薇大（潤百顏：130.0-1400.0μm，海薇：100.0-800.0μm，圖3-1）。圖3-12%甲苯胺藍(lán)溶液染色后肉眼及顯微鏡下觀察Figure3-1Visualandmicroscopicobservationafter2%toluidinebluestaininga潤百顏；b海薇；c潤百顏（40×）；d海薇（40×）aBiohyalux;bMatrifill;c40×,Biohyalux;d40×,Matrifill.在0U、2.5U、5.0U、10.0U、20.0UBTX-A作用下，潤百顏產(chǎn)品分別在60min、70min、80min、100min、100min達(dá)到最大酶解狀態(tài)，酶解率分別為72.149%、68.791%、64.683%、58.599%、58.334%（圖3-2、表3-1）。當(dāng)BTX-A劑量分別為5.0U、10.0U、20.0U時(shí)，在10min后潤百顏HA凝膠的酶解速率較對照組（0UBTX-A）減�。≒<0.05）；20min后，2.5U實(shí)驗(yàn)組也較對照組的酶解速率減小（P<0.05）；10.0U、20.0U實(shí)驗(yàn)組與其他實(shí)驗(yàn)組比較，在40min后酶解速率也顯著減小（P<0.001）。cdab

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]肉毒毒素與透明質(zhì)酸聯(lián)合治療的安全性研究以及對真皮層膠原含量的影響[D]. 陳兵.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2011
[2]A型肉毒毒素局部注射對大鼠胸舌骨肌作用的酶組織化學(xué)研究[D]. 王靜.四川大學(xué) 2006



本文編號：3047705