本文關鍵詞：MiR-27b通過PPAR-γ抑制軟骨細胞肥大化作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脊椎動物骨骼的生長發(fā)育主要是靠膜內骨化和軟骨內骨化完成的。其中,軟骨內骨化主要發(fā)生在四肢骨和軀干骨等大部分骨骼元件中,是骨的發(fā)育和生長階段中一個關鍵的生理過程。該過程起始于間充質干細胞的凝集并分化形成軟骨細胞,隨后,軟骨細胞經過增殖、成熟、肥大化的分化步驟分化為肥大化的軟骨細胞,再經歷細胞凋亡、鈣化、血管入侵,破骨細胞和造骨細胞產生等一系列過程,最終以退化的軟骨基質為構架產生骨基質。在某種情況下,軟骨細胞肥大化進程發(fā)生異常,將發(fā)生由軟骨降解和結構破壞、軟骨發(fā)育異常等原因引起的相關疾病,如,骨關節(jié)炎以及軟骨發(fā)育不全等。因此,深入研究軟骨細胞肥大化分子機制,對于軟骨細胞肥大化相關疾病的預防和治療具有重要意義。隨著micro RNAs(mi RNAs)在脊椎動物軟骨發(fā)育中的作用被發(fā)現(xiàn)和報道,在軟骨分化過程中的相關mi RNAs功能研究成為了骨關節(jié)炎與骨骼發(fā)育病理研究的一大熱點。本文旨在探究micro RNA-27b(mi R-27b)在軟骨細胞肥大化過程中的作用,并分析其通過靶基因之一過氧化物酶增殖物激活受體-γ(PPAR-γ)在軟骨細胞肥大化過程中的調控機制。本研究以出生1-3天的大鼠乳鼠膝關節(jié)軟骨為研究對象,用免疫組化、RT-PCR的方法觀察正常軟骨細胞標志物II型膠原(COL II)以及肥大化標志物X型膠原(COL X)、MMP-13的表達情況以確定膝關節(jié)軟骨的靜止區(qū)、增殖區(qū)和肥大化區(qū),用原位雜交實驗以及RT-q PCR檢測mi R-27b的分布情況。結合生物信息學網站、雙熒光素酶報告基因實驗系統(tǒng)以及Western blot確定PPAR-γ為其靶基因之一。并在此基礎上進行mi R-27b過表達實驗,分為實驗組(mi R-27b mimic)、陰性對照組(negative control)、和轉染試劑對照組(normal),分別從基因和蛋白水平證實mi R-27b對軟骨細胞肥大化的抑制作用。結果:1.形態(tài)學染色結果顯示,軟骨細胞柱狀排列,由關節(jié)表層至深層,體積逐漸增大,COL X表達增加。2.原位雜交結果顯示,mi R-27b主要表達在細胞核中,隨著軟骨細胞肥大化分化,其表達量逐漸下降。RT-q PCR結果顯示,與肥大化期軟骨細胞相比,靜止期軟骨細胞mi R-27b的表達高至6.2倍(P0.01)。3.通過生物信息學網站分析,確認PPAR-γ3’-UTR序列上存在mi R-27b的結合位點;雙熒光素酶報告基因實驗證實,在軟骨細胞中rno-mir-27b-3p對psi CHECK-PPAR-γ(p0.01)的熒光表達有顯著抑制作用。Western blot結果顯示,mi R-27b mimic轉染組,PPAR-γ2表達明顯下調。4.分離培養(yǎng)肥大化軟骨細胞,并對其進行過表達干預,同時用軟骨細胞肥大化誘導液繼續(xù)肥大化誘導。7天后,實驗組與對照組均有油紅O染色陽性的脂滴出現(xiàn),實驗組與轉染試劑對照組和陰性對照組相比,脂滴數(shù)量明顯降低(P0.01)。5.RT-q PCR結果顯示,mi R-27b過表達以后,COL II、SOX-9表達增加(P0.01),MMP-13、PPAR-γ表達下降(P0.01);Western blot結果顯示,mi R-27b過表達以后,PPAR-γ2與COL X的蛋白表達明顯受到抑制。結論:1.Mi R-27b對軟骨細胞肥大化發(fā)揮負調控作用。2.提高mi R-27b的表達可以推遲軟骨細胞肥大化進程。3.PPAR-γ是mi R-27b的靶基因之一,它可能通過某種機制正調控COL X的表達。
【關鍵詞】：軟骨細胞 肥大化 MiR-27b PPAR-γ
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R68
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-17
• 1.1 軟骨內骨化11-13
• 1.1.1 軟骨內骨化過程簡介11-12
• 1.1.2 軟骨細胞肥大化過程的調控12-13
• 1.1.3 軟骨細胞肥大化異常引發(fā)的相關疾病13
• 1.2 MicroRNAs與軟骨發(fā)育13-16
• 1.2.1 MicroRNAs簡介13-14
• 1.2.2 MiRNAs與軟骨發(fā)育調控14-15
• 1.2.3 MiR-27b與軟骨分化15-16
• 1.3 PPAR-γ 與軟骨分化16-17
• 第2章 材料與方法17-31
• 2.1 實驗材料17-20
• 2.1.1 實驗儀器和設備17-18
• 2.1.2 實驗試劑18-19
• 2.1.3 主要試劑的配制19-20
• 2.1.4 實驗動物20
• 2.2 實驗方法20-31
• 2.2.1 大鼠膝關節(jié)軟骨組織學染色20-21
• 2.2.2 原位雜交21-22
• 2.2.3 軟骨細胞分離培養(yǎng)22
• 2.2.4 RT-PCR及RT-qPCR22-27
• 2.2.5 雙熒光素酶報告基因實驗27-29
• 2.2.6 細胞轉染29
• 2.2.7 Western blot29-30
• 2.2.8 統(tǒng)計學分析30-31
• 第3章 實驗結果31-38
• 3.1 大乳鼠膝關節(jié)軟骨相關基因及miR-27b表達情況31-33
• 3.1.1 大乳鼠膝關節(jié)軟骨形態(tài)學特點31
• 3.1.2 大乳鼠膝關節(jié)軟骨組織相關基因表達情況31-32
• 3.1.3 大乳鼠膝關節(jié)軟骨組織miR-27b表達及分布情況32-33
• 3.2 MiR-27b靶點預測33-34
• 3.2.1 MiR-27b靶點生物信息學預測33
• 3.2.2 雙熒光素酶報告基因實驗33-34
• 3.3 Mi R-27b過表達干預實驗34-38
• 3.3.1 Mimics最佳轉染濃度篩選34-35
• 3.3.2 上調miR-27b后軟骨細胞轉分化現(xiàn)象35-36
• 3.3.3 上調miR-27b對肥大化軟骨細胞相關基因表達的影響36-37
• 3.3.4 上調miR-27b對肥大化軟骨細胞相關蛋白表達的影響37-38
• 第4章 討論38-43
• 第5章 結論43-44
• 參考文獻44-50
• 作者簡介和科研成果50-51
• 致謝51

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1 劉妮;李建強;楊淑娟;趙卉;;中介素1-53對肺缺血再灌注損傷大鼠肺組織PPAR-γ表達的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2010年04期

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3 狄政莉;牛小麟;魏瑾;李永勤;陳改玲;汪南平;;PPAR-γ在自發(fā)性高血壓大鼠血管平滑肌表達的增齡性變化[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2006年02期

4 劉穎;張唯力;譚丹;;PPAR-γ配體治療慢性非細菌性前列腺炎的實驗研究[J];中國男科學雜志;2008年05期

5 李曉翠;孫丹莉;張予蜀;張振玉;;非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟PPAR-γ的表達[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2011年14期

6 潘姝;李葉揚;戴麗冰;黃粵;;PPAR-γ在增生性瘢痕成纖維細胞中的表達及意義[J];廣東醫(yī)學;2009年11期

7 程晨;馮憑;蘇勝偶;;2型糖尿病患者PPAR-γ基因多態(tài)性與脂聯(lián)素和瘦素的相關性[J];天津醫(yī)藥;2006年12期

8 范建高,丁曉東,王國良,徐正婕,田麗艷,鄭曉英;高脂飲食性非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟PPAR-γ表達增強[J];肝臟;2004年04期

9 朱向東;梅曉云;王燕;曹燕飛;段永強;;痛瀉要方對潰瘍性結腸炎大鼠結腸黏膜PPAR-γ基因和蛋白表達的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年04期

10 韓敏;劉曉城;周文祥;張俊;;PPAR-γ在LDL誘導的大鼠系膜細胞增殖和基質硬化中的作用[J];中國微循環(huán);2006年02期

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1 戴兵;天俊;孫田美;梅長林;;PPAR-γ激動劑對囊腫襯里上皮細胞的增殖及凋亡的作用研究[A];“中華醫(yī)學會腎臟病學分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學術會議”論文匯編[C];2004年

2 楊輝;李瑜元;聶玉強;杜艷蕾;石勝利;賴曉波;周永健;詹琪;;PPAR-γ與PGC-1α基因多態(tài)性和非酒精性脂肪性肝病的關系[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

3 王良興;楊中衛(wèi);;PPAR-γ在COPD所致肺動脈高壓患者中的表達變化[A];2008年浙江省內科學學術會議論文匯編[C];2008年

4 沈洪;顧培青;劉麗;朱磊;朱萱萱;葉柏;鄭凱;劉亞軍;周曉波;劉云;;清腸化濕方對潰瘍性結腸炎模型大鼠結腸黏膜PPAR-γ蛋白表達的影響[A];中華中醫(yī)藥學會第二十一屆全國脾胃病學術交流會暨2009年脾胃病診療新進展學習班論文匯編[C];2009年

5 張麗;陳海平;;PPAR-γ激動劑對腎小球系膜細胞基質合成和降解的影響[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2006年學術年會論文集[C];2006年

6 陸邦超;鄒大進;;PPAR-γ激動劑對急性壞死性胰腺炎大鼠P38MAPK及其下游炎癥因子表達的影響[A];中華醫(yī)學會糖尿病學分會第十六次全國學術會議論文集[C];2012年

7 楊旭紅;劉立英;戴雯;;同型半胱氨酸硫內酯致血管內皮功能損傷機制與PPAR-γ相關性探討[A];湖南省首屆生理—藥理科學青年論壇論文摘要匯編[C];2009年

8 王穎;謝振華;劉紅霞;祖旭宇;于玲玲;蔣宇揚;徐威;;高效、快速的PPAR-γ激動劑篩選模型的建立[A];中國化學會第26屆學術年會化學生物分會場論文集[C];2008年

9 范偉;劉玉蘭;朱惠玲;侯永清;丁斌鷹;瞿永華;;PPAR-γ激活對脂多糖刺激的斷奶仔豬腸道結構和功能的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會第十次學術研討會論文集[C];2008年

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5 曾誠;二苯乙烯苷對炎癥性腸病的作用：誘導PPAR-γ和抑制NF-κB及其炎癥通路[D];華中科技大學;2011年

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1 黃云曼;蘭茵鳳揚化濁解毒方對潰瘍性結腸炎大鼠PPAR-γ、claudin-1及MUC2表達的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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5 徐金影;MiR-27b通過PPAR-γ抑制軟骨細胞肥大化作用的研究[D];吉林大學;2016年

6 袁寶玉;PPAR-γ激動劑治療實驗性自身免疫性腦脊髓炎的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2005年

7 黃乾雄;槲皮素對肝星狀細胞活化、增殖、凋亡及PPAR-γ表達的影響[D];南華大學;2008年

8 鄭曉新;替米沙坦對晚期糖基化終末產物誘導人血管內皮細胞炎癥反應的影響及與PPAR-γ的關系[D];福建醫(yī)科大學;2010年

9 劉玉環(huán);黃葵對腎小球系膜細胞增殖及PPAR-γ基因表達的影響[D];吉林大學;2007年

10 徐靜;肝臟X受體-α與PPAR-γ在急性肺損傷大鼠的協(xié)同抗炎作用[D];第三軍醫(yī)大學;2009年

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本文編號：300860