目的:研究低氧對TGF-β1誘導軟骨細胞肥大化的影響,明確可維持軟骨細胞表型的最佳氧氣濃度,為構建具有正常功能的組織工程化軟骨細胞的培養(yǎng)體系提供依據。方法:分離提取骨性關節(jié)炎、股骨頸骨折和股骨頭壞死患者的關節(jié)軟骨細胞,RT-q PCR檢測不同疾病患者來源軟骨細胞COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表達情況,通過免疫熒光染色檢測軟骨細胞內COLⅠ、COLⅡ和COLⅩ蛋白水平。利用甲苯胺藍染色鑒定培養(yǎng)后的P0代軟骨細胞表型。利用RT-q PCR比較P0-P3代軟骨細胞COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表達水平。利用不同TGF-β1濃度（5ng/m L、15ng/m L）和氧氣濃度（2%、20%）處理軟骨細胞,檢測COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表達情況及軟骨細胞線粒體復合酶Ⅰ的活性。結果:與股骨頸骨折軟骨細胞相比,骨性關節(jié)炎、股骨頭壞死軟骨細胞COL1A1表達水平分別提高（12.78±2.24）倍和（7.58±2... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

軟骨細胞鏡下觀(100×，標尺：100μm)

（圖 4.2）股骨頸骨折軟骨細胞、OA 軟骨細胞、股骨頭壞死軟骨細胞 COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH、PTHrP 表達量（*P<0.05、** P<0.01）4.3 未經培養(yǎng)的軟骨細胞免疫熒光染色為了比較股骨頸骨折軟骨細胞和 OA 軟骨細胞內 COLⅠ、COLⅡ、COLⅩ蛋白水平的差異，而采取了免疫熒光染色。發(fā)現股骨頸骨折軟骨細胞的 COLⅡ熒光信號強于 OA 軟骨細胞，而 OA 軟骨細胞的 COLⅠ、COLⅩ熒光信號強于股骨頸骨折軟骨細胞。這表明股骨頸骨折軟骨細胞內 COLⅡ含量高，而 COLⅠ、COLⅩ含量較低，具有正常軟骨細胞的表型；也從側面反映 OA 軟骨細胞失去了正常軟骨細胞的表型，結果如圖 4.3 所示。綜上分析，我們將以股骨頸骨折軟骨細胞作為培養(yǎng)、研究的對象。

17圖4.3 COLⅠ、COLⅡ、COLⅩ蛋白水平通過免疫熒光來表征。COLⅠ的免疫熒光染色為紅色，COLⅡ的免疫熒光染色為綠色，COLⅩ的免疫熒光染色為橘黃色。細胞核用DAPI染色顯示為藍色（放大倍數400×，標尺：20μm）4.4 培養(yǎng)后的軟骨細胞甲苯胺藍染色鑒定取已經培養(yǎng)好的P0代股骨頸骨折軟骨細胞進行甲苯胺藍染色鑒定。正常軟


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