目的:近來多數(shù)研究將組織工程材料與干細(xì)胞或因子復(fù)合來改善動(dòng)物脊髓損傷模型損傷處的微環(huán)境,以增加作用時(shí)長、提高恢復(fù)效果與預(yù)后。本研究旨在探究:1.制作音猬因子（SHH）-聚多巴胺（Polydopamine）-纖維蛋白（Fribin）支架并探究其緩釋效果與特性。2.構(gòu)建SD大鼠脊髓損傷模型,移植PD-SHH-Fibrin支架,觀察相關(guān)脊髓生長蛋白陽性率,評(píng)價(jià)其修復(fù)效果。方法:1.采用真空冷凍干燥機(jī)制作Fibrin支架,制作完成后置入配好的PH=8.5的鹽酸多巴胺溶液中浸泡24h進(jìn)行交聯(lián),再將交聯(lián)后的支架置入SHH溶液中吸附交聯(lián)24h,制作完成后使用ELISA試劑盒測其緩釋性能。2.取60只8周齡雌性SD大鼠,建立脊髓損傷模型,隨機(jī)分4組處理:A組不植入任何材料,B組損傷處植入Fibrin支架,C組損傷處植入PD-Fibrin支架,D組損傷處植入PD-SHH-Fibrin支架,術(shù)后12周內(nèi)進(jìn)行下肢運(yùn)動(dòng)功能BBB評(píng)分;術(shù)后12周取脊髓損傷處組織,分別進(jìn)行組織學(xué)觀察（蘇木精-伊紅與免疫組織化學(xué)）與Weston blot檢測。3.取40只8周齡雌性SD大鼠,建立脊髓損傷模型,隨機(jī)分4組處理:A組不... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

凍干后的纖維蛋白支架大小如圖A、B，掃描電鏡下Fibrin支架如圖C，PD-SHH-Fibrin如圖D，支架可見較多音猬因子顆粒黏附

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文9圖1.2：支架緩釋持續(xù)16d，在最初5d里緩慢釋放，在6-12d緩釋速度加快，最終在13-16d完全釋放，并在最后一天支架崩解加速釋放。Figure1.2Thesustainedreleaseofthescaffoldlastedfor16days,anditwasslowlyreleasedinthefirst5days,andthesustainedreleaseratewasacceleratedin6-12days,andfinallyreleasedin13-16days,andacceleratedreleaseonthelastday.4討論與Fibrin支架相比較，PD-SHH-Fibrin支架具有更好的緩釋性能與機(jī)械強(qiáng)度。Fibrin支架在體內(nèi)的降解時(shí)間大約7d，SHH緩釋時(shí)間較短[50-51]，且未使用凍干機(jī)處理過的Fibrin支架呈果凍樣，水分含量較高，注入大鼠脊髓斷端凝固后本身不利于脊髓再生軸突的通過，且由于其機(jī)械強(qiáng)度較低，在進(jìn)行大鼠肌肉縫合時(shí)很容易受壓而破碎，破碎的膠體對(duì)脊髓可能造成二次損傷和壓迫，不利于脊髓的修復(fù)。使用凍干機(jī)處理后的Fibrin支架不僅保留了其原有的三維孔道[27]，并且控制其大小與脊髓粗細(xì)相一致。已有研究通過在聚苯乙烯微球表面進(jìn)行多巴胺涂層修飾獲得了載藥微囊，后續(xù)通過在聚苯乙烯、聚乳酸-羥基乙酸共聚物材料表面使用多巴胺涂層固定神經(jīng)生長因子，從而提高神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化[52-53]。因此將凍干后的纖維蛋白支架給予多巴胺涂層修飾，多巴胺本身的膠水作用提高了支架吸附因子的能力，增加了對(duì)因子的黏附性，從而增加了載藥量，且多巴胺在纖維蛋白表面發(fā)生二次反應(yīng)形成聚多巴胺，進(jìn)一步增加了支架的機(jī)械強(qiáng)度。多巴胺涂層后的支架與機(jī)體有良好的相容性，其無毒性已得到廣泛認(rèn)可，具有良好的生物性能[25]。在術(shù)后輔助大鼠排尿時(shí)發(fā)現(xiàn)，用多巴胺涂層后支架的兩組自主恢復(fù)排尿時(shí)間較另外兩組提前，側(cè)面印證了多巴胺調(diào)節(jié)膀胱反射，恢復(fù)大鼠排尿反射[20]，其作用機(jī)制與信號(hào)通路值

SHH緩釋的聚多巴胺纖維蛋白支架促大鼠脊髓損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究14圖2.1SD大鼠SCI建模過程。A~D:大鼠常規(guī)備皮消毒，做背部正中切口，逐層分離皮膚，筋膜，肌肉后暴露T9-T12棘突及椎板，咬骨鉗咬去椎板和棘突，除去硬脊膜，用刀片橫斷T10-T11節(jié)段脊髓。E:脊髓橫斷切口內(nèi)移植支架（Fibrin，PD-Fibrin，PD-SHH-Fibrin）F~H:手術(shù)結(jié)束，逐層縫合肌肉、筋膜、皮膚，觀察手術(shù)切口處無明顯出血，再次碘伏棉球消毒。I:術(shù)后大鼠分籠喂養(yǎng)。J:二次手術(shù)時(shí)再次切開皮膚，見大量新生纖維結(jié)締及肉芽組織，粘連嚴(yán)重，緩慢暴露出斷端。在橫斷遠(yuǎn)端約10mm處緩慢注入熒光金。K：大鼠麻醉后定位大腿脛前肌，行電生理檢查。L:術(shù)后繼續(xù)分籠喂養(yǎng)。Figure2.1TheSDratSCImodelingprocess.A~D:Ratsareroutinelypreparedforskindisinfection,doamid-backincision,andseparatetheskin,fascia,andmusclestoexposetheT9-T12spinousprocessesandlaminaafterthemuscles.Bonebiteforcepsremovethelaminaandspinousprocess,removetheduramater,anduseabladetotraversetheT10-T11segmentofthespinalcord.E:Transplantationscaffold(Fibrin,PD-Fibrin,PD-SHH-Fibrin)inspinalcordtransverseincisionF~H:Attheendoftheoperation,themuscle,fascia,andskinweresuturedlayerbylayer,andtherewasnoobviousbleedingatthesurgicalincision.,andthentheiodophorcottonballwasdisinfectedagain.I:Aftersurgery,theratswerefedinseparatecages.J:Afterthesecondoperation,theskinwascutagain,andalargeamountofnewfiberconnectiveandgranulationtissuewereseen.SlowlyinjectFGapproximately10mmawayfromspinalcordinjury.K:Theanteriorthighmusclesofthethighwerelocatedafteranesthesia,andelectrophysio


本文編號(hào)：2982078