目的:探討缺氧復氧環(huán)境對成骨細胞自噬水平的影響。方法:取24⁴8 h內(nèi)新生SD大鼠的頭蓋骨,通過組織塊貼壁法培養(yǎng)和差速離心法純化成骨細胞,采用茜素紅染色和堿性磷酸酶染色法對成骨細胞礦化鈣結(jié)節(jié)及成骨細胞生物學特性進行鑒定。將第3代成骨細胞在正常狀態(tài)下培養(yǎng),并隨機分為4組:A組在正常狀態(tài)下培養(yǎng)36 h;B組在正常狀態(tài)下培養(yǎng)18 h,再在缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)18h;C組在缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)36 h;D組在缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)18 h,再在正常狀態(tài)下培養(yǎng)18 h。培養(yǎng)結(jié)束后觀察4組細胞形成礦化鈣結(jié)節(jié)的能力,同時采用CCK-8法檢測細胞增殖活性。隨后采用定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測自噬特異性基因Beclin1、微管相關蛋白輕鏈3（LC3）及成骨細胞特異性基因膠原蛋白Ⅰ（COL-Ⅰ）和骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP-2）的表達。免疫蛋白印記技術檢測成骨細胞自噬蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及自噬選擇性底物P62蛋白的表達。組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析。結(jié)果:4組成骨細胞培養(yǎng)18d后通過茜素紅染色發(fā)現(xiàn)A組成骨細胞礦化鈣結(jié)節(jié)能力最強,而B、C和D組礦化鈣結(jié)節(jié)能力明顯降低,且D組... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學院安徽省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

成骨細胞造模后4組成骨細胞茜素紅染色圖（×40）

圖 1 成骨細胞的生物學性質(zhì)檢測：A 為成骨細胞茜素紅染色，可見成團的紅色鈣結(jié)節(jié)（×40）；B 為堿性磷酸酶染色，可見細胞形態(tài)呈現(xiàn)梭形、多邊形，細胞內(nèi)有紫褐色顆粒（×40）2 缺氧復氧對成骨細胞生物學性質(zhì)的影響成骨細胞培養(yǎng) 18 d 后，A 組在正常培養(yǎng)皿培養(yǎng)后成骨細胞鈣化能力最強，和 A

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氧環(huán)境對成骨細胞活性的影響[J]. 武成,鄭偉偉,楊民.  中華醫(yī)學雜志. 2017 (03)
[2]白藜蘆醇誘導細胞自噬在神經(jīng)退行性疾病進展中的作用[J]. 董雯,王蓉.  藥學學報. 2016(01)
[3]原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的病因?qū)W研究進展[J]. 王方,鄒德威,吳繼功,馬華松.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2012(07)
[4]缺氧條件對成骨細胞VEGF和TGF-β1表達影響的實驗研究[J]. 關鍵,王健平,車笑非,李德超.  中國修復重建外科雜志. 2008(08)
[5]丹參對人成骨細胞缺血-再灌注損傷的保護作用[J]. 王福生,王立德,谷玲,宋淑云,洪新,李素鳳.  中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志. 2000(05)

碩士論文
[1]缺氧及缺氧復氧環(huán)境對成骨細胞影響的研究[D]. 武成.皖南醫(yī)學院 2017
[2]缺氧對大鼠成骨細胞作用機制的研究[D]. 顧九君.蘭州大學 2007



本文編號：2976719