發(fā)布時(shí)間：2021-01-14 10:20

　　目的:探討缺氧復(fù)氧環(huán)境對(duì)成骨細(xì)胞自噬水平的影響。方法:取24⁴8 h內(nèi)新生SD大鼠的頭蓋骨,通過組織塊貼壁法培養(yǎng)和差速離心法純化成骨細(xì)胞,采用茜素紅染色和堿性磷酸酶染色法對(duì)成骨細(xì)胞礦化鈣結(jié)節(jié)及成骨細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。將第3代成骨細(xì)胞在正常狀態(tài)下培養(yǎng),并隨機(jī)分為4組:A組在正常狀態(tài)下培養(yǎng)36 h;B組在正常狀態(tài)下培養(yǎng)18 h,再在缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)18h;C組在缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)36 h;D組在缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)18 h,再在正常狀態(tài)下培養(yǎng)18 h。培養(yǎng)結(jié)束后觀察4組細(xì)胞形成礦化鈣結(jié)節(jié)的能力,同時(shí)采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。隨后采用定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)自噬特異性基因Beclin1、微管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）及成骨細(xì)胞特異性基因膠原蛋白Ⅰ（COL-Ⅰ）和骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP-2）的表達(dá)。免疫蛋白印記技術(shù)檢測(cè)成骨細(xì)胞自噬蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及自噬選擇性底物P62蛋白的表達(dá)。組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析。結(jié)果:4組成骨細(xì)胞培養(yǎng)18d后通過茜素紅染色發(fā)現(xiàn)A組成骨細(xì)胞礦化鈣結(jié)節(jié)能力最強(qiáng),而B、C和D組礦化鈣結(jié)節(jié)能力明顯降低,且D組... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

成骨細(xì)胞造模后4組成骨細(xì)胞茜素紅染色圖（×40）

圖 1 成骨細(xì)胞的生物學(xué)性質(zhì)檢測(cè)：A 為成骨細(xì)胞茜素紅染色，可見成團(tuán)的紅色鈣結(jié)節(jié)（×40）；B 為堿性磷酸酶染色，可見細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)梭形、多邊形，細(xì)胞內(nèi)有紫褐色顆粒（×40）2 缺氧復(fù)氧對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)性質(zhì)的影響成骨細(xì)胞培養(yǎng) 18 d 后，A 組在正常培養(yǎng)皿培養(yǎng)后成骨細(xì)胞鈣化能力最強(qiáng)，和 A

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]白藜蘆醇誘導(dǎo)細(xì)胞自噬在神經(jīng)退行性疾病進(jìn)展中的作用[J]. 董雯,王蓉.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2016(01)
[3]原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的病因?qū)W研究進(jìn)展[J]. 王方,鄒德威,吳繼功,馬華松.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2012(07)
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碩士論文
[1]缺氧及缺氧復(fù)氧環(huán)境對(duì)成骨細(xì)胞影響的研究[D]. 武成.皖南醫(yī)學(xué)院 2017
[2]缺氧對(duì)大鼠成骨細(xì)胞作用機(jī)制的研究[D]. 顧九君.蘭州大學(xué) 2007



本文編號(hào)：2976719