第一部分脊索樣髓核細胞的分離提取目的:分別通過percoll密度梯度離心法以及細胞篩法分離并培養(yǎng)大鼠尾椎來源的脊索樣髓核細胞,通過形態(tài)學手段觀察鑒定脊索樣髓核細胞,比較兩種技術分離脊索樣髓核細胞方法的效率,為下一步細胞學分析鑒定實驗基礎。方法:取4周齡的SD大鼠30只,隨機分成無篩組、percoll密度梯度離心組與細胞篩組。取大鼠尾椎髓核組織,分別通過無篩組、percoll密度梯度離心法與細胞篩法分離出髓核細胞。光鏡下觀察各組方法下細胞形態(tài)學標記并分類計數(shù),透射電鏡下觀察脊索樣髓核細胞形態(tài)。結(jié)果:無篩組提取細胞總數(shù)較多（p<0.05）,有“液泡”結(jié)構(gòu)細胞/視野下細胞總數(shù)比例低于兩種篩選提取法（p<0.05）。percoll組提取的有“液泡”結(jié)構(gòu)的細胞較細胞篩組更多（p<0.05）,percoll組提取的細胞總數(shù)也高于細胞篩組（p<0.05）。percoll組下觀察到有“液泡”結(jié)構(gòu)細胞/視野下細胞總數(shù)的比例與細胞篩法無明顯統(tǒng)計學差異（p>0.05）。電鏡可見脊索樣髓核細胞多為20-30μm大小,細胞胞漿內(nèi)富含大小不等的各類空泡,是一種由不完整的胞漿單層胞膜包... 

【文章來源】：東南大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：兩種方式提取脊索樣髓核細胞（２００ｘ）?：Ａ細胞篩法；Ｂｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度離心法??

?第一部分眢索樣髓核細胞的分萬提取???用高倍顯微鏡可見胞漿內(nèi)明顯大而猜亮空泡的脊索祥髄核細胞（圖２Ｄ）．??議??圖２脊索樣髓核細胞形態(tài)觀察：ＡＢＣ透射電鏡下脊索細脃約２０－３０／ｊｍ，胞漿內(nèi)空泡為不連續(xù)單層胞膜結(jié)構(gòu)；??Ｄ光鏡下脊索細胞可見胞內(nèi)空泡大而清亮。??２７??

?第一部分脊索樣髓核細胞的分離提取???３實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)分析??３．１?ＢＦＡ組、對照組和空白組脊索樣髓核細胞形態(tài)學觀察：??Ａ?Ｂ??＿?＿??ｃ?－??：遍囊??圖３：對照組（Ａ）、ＢＦＡ組（Ｂ）和空白組（Ｃ）脊索樣髓核細胞形態(tài)學觀察??如圖３可見，２〇（ｋ倒置光學顯微鏡下，較對照組與空白組（圖３??ＡＣ）內(nèi)多角形細胞內(nèi)較多大而致密的細胞內(nèi)空泡，ＢＦＡ處理后的脊索??樣髓核細胞雖外形維持為多角形，但胞質(zhì)內(nèi)空泡減少，且較為細碎。??使用ＩｍａｇｅＪ軟件計算空泡在細胞內(nèi)的面積。如表３，ＢＦＡ組細胞??空抱空泡面積比較其余兩組較�。ǎ校缉枺枺担瞻捉M與對照組內(nèi)無差??別（ｐ＞０．〇５）。ＢＦＡ處理后確實對脊索樣髓核細胞內(nèi)空泡形成有抑制??作用。??３２??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠尾椎與腰椎髓核組織及細胞的分離培養(yǎng)以及髓核表型的對比研究[J]. 康新桂,吳小濤,王鋒,時睿,蔡峰,朱厚毅.  東南大學學報(醫(yī)學版). 2016(03)
[2]Hedgehog信號轉(zhuǎn)導通路與軟骨細胞[J]. 肖良,徐宏光.  國際骨科學雜志. 2016(02)
[3]滲透壓負荷對兔椎間盤器官培養(yǎng)模型的影響[J]. 牛朋彥,熊偉,李鋒,周松,陳文堅,霍喜衛(wèi).  中國脊柱脊髓雜志. 2009(10)

博士論文
[1]脊索細胞體外誘導骨髓間充質(zhì)干細胞定向分化及聯(lián)合移植阻止兔椎間盤退行性變的實驗研究[D]. 張彥男.華中科技大學 2011
[2]脊索細胞遺跡與脊索瘤發(fā)生的相關性研究[D]. 沈軍.蘇州大學 2010



本文編號：2971721