目的通過構(gòu)建大鼠華勒氏變性體外模型,研究在周圍神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性早期,SD大鼠脂肪干細胞對雪旺細胞增殖與去分化的影響。方法在無菌條件下從SD大鼠腹股溝取出皮下脂肪組織,采用I型膠原酶消化法分離提取大鼠脂肪干細胞并進行體外培養(yǎng)和傳代,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長情況。通過流式細胞學(xué)鑒定其脂肪干細胞相關(guān)表面標(biāo)記物。獲取大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)制備大鼠華勒變性體外模型,并進行分組,實驗組即是將大鼠華勒變性體外模型與脂肪干細胞進行非接觸式共培養(yǎng),對照組為單獨體外培養(yǎng)的大鼠華勒變性體外模型。Real time PCR檢測不同時間點（0h,24h,72h）實驗組與對照組p75NTR和MPZ m RNA表達量。Western blot檢測體外培養(yǎng)72h后實驗組與對照組p75NTR和MPZ蛋白表達量。培養(yǎng)不同時間點（24h,48h,72h）后免疫組化染色法檢測兩組雪旺細胞增殖標(biāo)記物Ki67的表達情況,Tunel法檢測兩組雪旺細胞的凋亡情況。結(jié)果成功分離培養(yǎng)SD大鼠脂肪干細胞,流式細胞儀檢測脂肪干細胞高度表達CD90,CD105,不表達CD34。Real time PCR結(jié)果顯示體外華勒氏變性模型中雪旺細胞去... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

倒置顯微鏡下SD大鼠原代脂肪干細胞(ADSCs)形態(tài)（×40）

圖 2 SD 大鼠脂肪干細胞(ADSCs)表面抗原標(biāo)記物檢測Fig2 Detection of surface antigen marker on ADSCs3.3Real time PCR 檢測脂肪干細胞（ADSCs）干預(yù)后體外華勒氏變性模型中雪旺細胞去分化標(biāo)記物 p75NTR 和分化標(biāo)記物 MPZ 的 mRNA 表達情況將單獨培養(yǎng)的大鼠體外華勒氏變性模型中的坐骨神經(jīng)組織設(shè)為對照組，同時將與第 2 代脂肪干細胞（ADSCs）通過 Transwell 小室進行非接觸式共培養(yǎng)的坐骨神經(jīng)組織設(shè)為實驗組，收集不同時間點（0 小時，24 小時，72 小時）的大鼠坐骨神經(jīng)組織，用 Real time PCR 檢測不同時間點實驗組與對照組 p75NTR 和 MPZmRNA 表達量相對值（以 β-actin 為內(nèi)參基因）。采用兩樣本 t 檢驗對不同時間點（24 小時，72 小時）實驗組與對照組 p75NTR 和 MPZ mRNA 表達量的差異進行統(tǒng)計分析。結(jié)果如圖 3 所示，隨著時間推移，體外華勒氏變性模型中雪旺細胞去分化標(biāo)記物 p75NTR mRNA 表達量逐漸增高，實驗組 p75NTR mRNA 表達量增高較

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文模型中雪旺細胞分化標(biāo)記物 MPZ mRNA 表達量則逐漸降低，且實驗組降低趨勢較對照組更加明顯，培養(yǎng) 72 小時后，實驗組 MPZ mRNA 表達量較對照組顯著降低（72h co-culture vs 72h control ，t=10.16，p<0.001）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cytokines in adipose-derived mesenchymal stem cells promote the healing of liver disease[J]. Saifun Nahar,Yoshiki Nakashima,Chika Miyagi-Shiohira,Takao Kinjo,Zensei Toyoda,Naoya Kobayashi,Issei Saitoh,Masami Watanabe,Hirofumi Noguchi,Jiro Fujita.  World Journal of Stem Cells. 2018(11)
[2]脂肪源性干細胞促進大鼠神經(jīng)施萬細胞增殖和分泌功能[J]. 宋起濱,王哲,王宇令,李楊,林爽.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(06)

博士論文
[1]IL-1β對外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中施旺細胞的影響[D]. 陳剛.南方醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]TNF-α對施萬細胞去分化和干細胞標(biāo)志物表達的影響[D]. 高雅姍.上海交通大學(xué) 2015



本文編號：2962412