發(fā)布時(shí)間：2021-01-07 10:38

　　目的通過構(gòu)建大鼠華勒氏變性體外模型,研究在周圍神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性早期,SD大鼠脂肪干細(xì)胞對(duì)雪旺細(xì)胞增殖與去分化的影響。方法在無菌條件下從SD大鼠腹股溝取出皮下脂肪組織,采用I型膠原酶消化法分離提取大鼠脂肪干細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)和傳代,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長情況。通過流式細(xì)胞學(xué)鑒定其脂肪干細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)記物。獲取大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)制備大鼠華勒變性體外模型,并進(jìn)行分組,實(shí)驗(yàn)組即是將大鼠華勒變性體外模型與脂肪干細(xì)胞進(jìn)行非接觸式共培養(yǎng),對(duì)照組為單獨(dú)體外培養(yǎng)的大鼠華勒變性體外模型。Real time PCR檢測不同時(shí)間點(diǎn)（0h,24h,72h）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組p75NTR和MPZ m RNA表達(dá)量。Western blot檢測體外培養(yǎng)72h后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組p75NTR和MPZ蛋白表達(dá)量。培養(yǎng)不同時(shí)間點(diǎn)（24h,48h,72h）后免疫組化染色法檢測兩組雪旺細(xì)胞增殖標(biāo)記物Ki67的表達(dá)情況,Tunel法檢測兩組雪旺細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果成功分離培養(yǎng)SD大鼠脂肪干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測脂肪干細(xì)胞高度表達(dá)CD90,CD105,不表達(dá)CD34。Real time PCR結(jié)果顯示體外華勒氏變性模型中雪旺細(xì)胞去... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

倒置顯微鏡下SD大鼠原代脂肪干細(xì)胞(ADSCs)形態(tài)（×40）

圖 2 SD 大鼠脂肪干細(xì)胞(ADSCs)表面抗原標(biāo)記物檢測Fig2 Detection of surface antigen marker on ADSCs3.3Real time PCR 檢測脂肪干細(xì)胞（ADSCs）干預(yù)后體外華勒氏變性模型中雪旺細(xì)胞去分化標(biāo)記物 p75NTR 和分化標(biāo)記物 MPZ 的 mRNA 表達(dá)情況將單獨(dú)培養(yǎng)的大鼠體外華勒氏變性模型中的坐骨神經(jīng)組織設(shè)為對(duì)照組，同時(shí)將與第 2 代脂肪干細(xì)胞（ADSCs）通過 Transwell 小室進(jìn)行非接觸式共培養(yǎng)的坐骨神經(jīng)組織設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，收集不同時(shí)間點(diǎn)（0 小時(shí)，24 小時(shí)，72 小時(shí)）的大鼠坐骨神經(jīng)組織，用 Real time PCR 檢測不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組 p75NTR 和 MPZmRNA 表達(dá)量相對(duì)值（以 β-actin 為內(nèi)參基因）。采用兩樣本 t 檢驗(yàn)對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)（24 小時(shí)，72 小時(shí)）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組 p75NTR 和 MPZ mRNA 表達(dá)量的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果如圖 3 所示，隨著時(shí)間推移，體外華勒氏變性模型中雪旺細(xì)胞去分化標(biāo)記物 p75NTR mRNA 表達(dá)量逐漸增高，實(shí)驗(yàn)組 p75NTR mRNA 表達(dá)量增高較

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文模型中雪旺細(xì)胞分化標(biāo)記物 MPZ mRNA 表達(dá)量則逐漸降低，且實(shí)驗(yàn)組降低趨勢(shì)較對(duì)照組更加明顯，培養(yǎng) 72 小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組 MPZ mRNA 表達(dá)量較對(duì)照組顯著降低（72h co-culture vs 72h control ，t=10.16，p<0.001）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cytokines in adipose-derived mesenchymal stem cells promote the healing of liver disease[J]. Saifun Nahar,Yoshiki Nakashima,Chika Miyagi-Shiohira,Takao Kinjo,Zensei Toyoda,Naoya Kobayashi,Issei Saitoh,Masami Watanabe,Hirofumi Noguchi,Jiro Fujita.  World Journal of Stem Cells. 2018(11)
[2]脂肪源性干細(xì)胞促進(jìn)大鼠神經(jīng)施萬細(xì)胞增殖和分泌功能[J]. 宋起濱,王哲,王宇令,李楊,林爽.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(06)

博士論文
[1]IL-1β對(duì)外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中施旺細(xì)胞的影響[D]. 陳剛.南方醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]TNF-α對(duì)施萬細(xì)胞去分化和干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)的影響[D]. 高雅姍.上海交通大學(xué) 2015



本文編號(hào)：2962412