背景:間充質(zhì)干細胞（MSC）的移植通過促進內(nèi)皮再生為移植動脈硬化的治療帶來了新的希望。然而,其功效和安全性仍在研究中,特別是,最近有研究發(fā)現(xiàn)新生內(nèi)膜的平滑肌細胞來源于MSC樣細胞。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）/晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）信號通路參與調(diào)節(jié)MSCs的遷移和分化,因此我們推測其可被用于改善細胞治療的結(jié)果。目的:本研究的目的就是探究這一假設(shè)。方法:用HMGB1細胞因子處理或用HMGB1慢病毒載體修飾大鼠MSCs以激活HMGB1/RAGE信號通路。RAGE通過特異性RNA載體進行靶向抑制。我們評估了體外載體轉(zhuǎn)染后的細胞和移植動脈硬化大鼠模型中移植的細胞的遷移和分化能力。測定CD31和α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的表達水平用以評估MSC向內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的分化能力。結(jié)果:用外源性HMGB1細胞因子處理或HMGB1慢病毒載體轉(zhuǎn)染能夠促進MSC遷移并能夠促進血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）誘導(dǎo)MSC分化為CD31陽性（CD31+）細胞,同時抑制血小板衍生生長因子（PDGF）誘導(dǎo)MSC分化成α-SMA陽性（α-SMA+）細胞。敲低RAGE表達水平可阻斷上述效應(yīng)。HMGB1修飾... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒載體轉(zhuǎn)染MSCs后，分別通過細胞免疫熒光實驗及westernblot蛋白免疫熒光實驗檢測HMGB1及RAGE的表達

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文二、HMGB1 通過活化 RAGE 促進 MSC 遷移HMGB1 / RAGE 信號通路能夠促進 MSC 遷移。用重組 HMGB1 處理細胞或用pLV-HMGB1 轉(zhuǎn)染細胞后，transwell 小室實驗結(jié)果表明遷移的 MSC 的數(shù)目與對照組相比明顯增加。然而，RAGE 敲除能夠抑制 HMGB1 誘導(dǎo)的細胞遷移。用pshRNA-RAGE 轉(zhuǎn)染的細胞對 HMGB1 處理的反應(yīng)較差，并且遷移細胞的數(shù)量顯著低于陰性對照組（圖 2）。

17圖 3：分別接受高遷移率族蛋白 1（HMGB1）刺激和晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）抑制處理后 MSCs 向 CD31+細胞分化情況。通過免疫熒光染色實驗（a）和流式細胞技術(shù)（b）檢測 CD31 +細胞群。外源性 HMGB1 處理和 pLV-HMGB1 轉(zhuǎn)染均可協(xié)調(diào)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）誘導(dǎo) MSC 向 CD31 +細胞分化。在 100ng / ml HMGB1處理時，CD31 +細胞的比例從 16％增加到 27％，并且在 pLV-HMGB1 轉(zhuǎn)染后從 21％增加到 58％。 然而，刺激效應(yīng)可被 RAGE 敲低抑制。 用 pshRNA-RAGE1，pshRNA-RAGE2 和 pshRNA-RAGE3 轉(zhuǎn)染細胞后，CD31 +細胞的百分比分別從 22.5％降至 3.0％，6.4％和 4.0％。每組實驗重復(fù)三次。數(shù)據(jù)使用曼 - 惠特尼檢驗進行組間比較。 ** P <0.05。DAPI 4'，6-二脒基-2-苯基吲哚


本文編號：2940509