背景:間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的移植通過促進(jìn)內(nèi)皮再生為移植動(dòng)脈硬化的治療帶來了新的希望。然而,其功效和安全性仍在研究中,特別是,最近有研究發(fā)現(xiàn)新生內(nèi)膜的平滑肌細(xì)胞來源于MSC樣細(xì)胞。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）/晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)MSCs的遷移和分化,因此我們推測(cè)其可被用于改善細(xì)胞治療的結(jié)果。目的:本研究的目的就是探究這一假設(shè)。方法:用HMGB1細(xì)胞因子處理或用HMGB1慢病毒載體修飾大鼠MSCs以激活HMGB1/RAGE信號(hào)通路。RAGE通過特異性RNA載體進(jìn)行靶向抑制。我們?cè)u(píng)估了體外載體轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞和移植動(dòng)脈硬化大鼠模型中移植的細(xì)胞的遷移和分化能力。測(cè)定CD31和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)水平用以評(píng)估MSC向內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的分化能力。結(jié)果:用外源性HMGB1細(xì)胞因子處理或HMGB1慢病毒載體轉(zhuǎn)染能夠促進(jìn)MSC遷移并能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）誘導(dǎo)MSC分化為CD31陽性（CD31+）細(xì)胞,同時(shí)抑制血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）誘導(dǎo)MSC分化成α-SMA陽性（α-SMA+）細(xì)胞。敲低RAGE表達(dá)水平可阻斷上述效應(yīng)。HMGB1修飾... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒載體轉(zhuǎn)染MSCs后，分別通過細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)及westernblot蛋白免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HMGB1及RAGE的表達(dá)

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文二、HMGB1 通過活化 RAGE 促進(jìn) MSC 遷移HMGB1 / RAGE 信號(hào)通路能夠促進(jìn) MSC 遷移。用重組 HMGB1 處理細(xì)胞或用pLV-HMGB1 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，transwell 小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明遷移的 MSC 的數(shù)目與對(duì)照組相比明顯增加。然而，RAGE 敲除能夠抑制 HMGB1 誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移。用pshRNA-RAGE 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對(duì) HMGB1 處理的反應(yīng)較差，并且遷移細(xì)胞的數(shù)量顯著低于陰性對(duì)照組（圖 2）。

17圖 3：分別接受高遷移率族蛋白 1（HMGB1）刺激和晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）抑制處理后 MSCs 向 CD31+細(xì)胞分化情況。通過免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)（a）和流式細(xì)胞技術(shù)（b）檢測(cè) CD31 +細(xì)胞群。外源性 HMGB1 處理和 pLV-HMGB1 轉(zhuǎn)染均可協(xié)調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）誘導(dǎo) MSC 向 CD31 +細(xì)胞分化。在 100ng / ml HMGB1處理時(shí)，CD31 +細(xì)胞的比例從 16％增加到 27％，并且在 pLV-HMGB1 轉(zhuǎn)染后從 21％增加到 58％。 然而，刺激效應(yīng)可被 RAGE 敲低抑制。 用 pshRNA-RAGE1，pshRNA-RAGE2 和 pshRNA-RAGE3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，CD31 +細(xì)胞的百分比分別從 22.5％降至 3.0％，6.4％和 4.0％。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。數(shù)據(jù)使用曼 - 惠特尼檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。 ** P <0.05。DAPI 4'，6-二脒基-2-苯基吲哚


本文編號(hào)：2940509