肌肉和骨骼在骨質(zhì)疏松、肌少癥等疾病中往往同步變化,存在密切聯(lián)系。相鄰肌骨之間存在正反饋的回路機(jī)制,以通過分泌調(diào)控因子相互調(diào)節(jié),并且在細(xì)胞水平存在細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo),但均屬于分泌蛋白。外泌體作為一種由細(xì)胞分泌的囊泡,可以介導(dǎo)多種活性分子進(jìn)入受體細(xì)胞發(fā)揮調(diào)控作用。其中,外泌體對(duì)miRNA有濃縮作用,且外泌體膜結(jié)構(gòu)可以保護(hù)miRNA免受RNA酶的降解,功能性miRNA具有多靶點(diǎn)調(diào)控效應(yīng)。已有研究表明外泌體可以介導(dǎo)功能性miRNA進(jìn)入受體細(xì)胞發(fā)揮調(diào)控作用。但目前以外泌體的角度闡述肌骨間相互作用的研究尚未見報(bào)道。目的:本研究旨在明確成肌細(xì)胞外泌體對(duì)成骨細(xì)胞成骨分化的促進(jìn)作用,并對(duì)其介導(dǎo)miRNA促成骨分化的作用機(jī)制作進(jìn)一步探索,為骨組織工程的研究和相關(guān)疾病治療提供新的思路和理論依據(jù)。方法:（1）提取成肌細(xì)胞C2C12細(xì)胞外泌體,采用透射電鏡和Western blot法從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)兩方面對(duì)其進(jìn)行鑒定。（2）為檢測(cè)C2C12細(xì)胞外泌體對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞礦化能力的影響,示蹤實(shí)驗(yàn)確定外泌體進(jìn)入到細(xì)胞,MC3T3-E1細(xì)胞中加入提取得到的外泌體繼續(xù)培養(yǎng),構(gòu)建成骨誘導(dǎo)模型,茜素紅染色、ALP活性檢測(cè)... 

【文章來源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

2C12細(xì)胞外泌體的鑒定Fig.2.IdentificationofC2C12cellexosomes

圖 1. C2C12 細(xì)胞外泌體的提取Fig.1. Extraction of C2C12 cell exosomes體的鑒定采用 Exoquick 試劑提取得到外泌體后，包埋切片后經(jīng)透射電鏡觀察發(fā)在 30-100 nm 之間。Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，提取得到的 C2C12胞組相比，均表達(dá) CD9、CD63 和 CD81 標(biāo)記蛋白。綜上結(jié)果確定，肌細(xì)胞 C2C12 細(xì)胞來源的外泌體。

3. C2C12 細(xì)胞外泌體能夠進(jìn)入 MC3T3-E1 細(xì)胞內(nèi)somes derived from C2C12 myoblasts entered MC3T種板后經(jīng)礦化誘導(dǎo)液和加入外泌體的礦化誘盒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，觀察鑒定加入外泌體后。圖 4 為茜素紅染色結(jié)果的鏡下觀察圖，M為加入外泌體的礦化誘導(dǎo)液誘導(dǎo)組，結(jié)果發(fā) 天后宏觀條件下可以看到明顯的礦化結(jié)節(jié)，的礦化結(jié)節(jié)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wnt2/β-catenin信號(hào)通路及其在腫瘤中的作用[J]. 李華,周德俊.  廣東醫(yī)學(xué). 2015(02)
[2]miR-26a對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的調(diào)控作用[J]. 范龍坤,華澤權(quán),金巖,時(shí)炳正.  中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(07)



本文編號(hào)：2937538