本文關(guān)鍵詞：膽汁內(nèi)外引流術(shù)對(duì)梗阻性黃疸大鼠腸黏膜MUC2蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來(lái),大量科學(xué)研究證實(shí)腸黏膜屏障損傷是導(dǎo)致梗阻性黃疸(obstructive jaundice,OJ)菌血癥及內(nèi)毒素血癥的重要原因,并會(huì)引發(fā)全身炎癥反應(yīng)及多器官功能障礙危及生命。腸道黏液層(mucus layer)是宿主腸黏膜第一道天然防御屏障,它主要由腸道杯狀細(xì)胞合成和分泌的黏蛋白-2(mucin 2,MUC2)組成,MUC2蛋白通過(guò)其N-端和C-端蛋白結(jié)構(gòu)域形成巨大網(wǎng)狀聚合物,構(gòu)成腸道黏液層骨架,在腸道黏液屏障中起到了至關(guān)重要的保護(hù)作用。正常腸道黏液層中,MUC2蛋白能夠潤(rùn)滑腸道,避免腸道有害物質(zhì)與腸上皮細(xì)胞直接接觸,同時(shí)還能發(fā)揮免疫屏障功能,抵御腸腔病原體的侵害。多項(xiàng)研究證實(shí)腸黏膜屏障損傷時(shí),腸道黏液層變薄、破損,MUC2蛋白表達(dá)改變,導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞被細(xì)菌侵襲,腸黏膜穩(wěn)態(tài)失衡,炎癥反應(yīng)加重,所以積極開(kāi)展對(duì)OJ時(shí)腸道黏液層及MUC2蛋白的實(shí)驗(yàn)性研究,具有重大臨床指導(dǎo)意義。OJ是一類由于肝外或肝內(nèi)膽管梗阻,引起膽紅素升高,并出現(xiàn)組織及體液黃染等一系列臨床表現(xiàn)的疾病,目前臨床上引起膽道梗阻疾病很多,但主要分為兩大類,一類是良性病變,包括膽總管或肝總管結(jié)石、膽管良性狹窄、膽腸吻合口狹窄;另一類是惡性疾病,包括肝門(mén)部膽管癌、壺腹周?chē)⒁阮^癌;對(duì)于惡性O(shè)J病人,外科手術(shù)仍然是主要的治療方法,但對(duì)于外科手術(shù)前是否需要解除梗阻,目前仍有爭(zhēng)議,一方認(rèn)為術(shù)前解除梗阻能有效降低術(shù)后發(fā)病率和死亡率;另一方認(rèn)為解除梗阻的操作本身會(huì)引起并發(fā)癥,最終導(dǎo)致弊大于利;而且對(duì)于解除膽道梗阻的方式,是采用膽汁內(nèi)引流術(shù),還是膽汁外引流術(shù),迄今仍有爭(zhēng)議;多數(shù)學(xué)者認(rèn)為內(nèi)引流術(shù)更符合人體正常生理解剖,并恢復(fù)膽汁酸腸肝循環(huán),能提供重要抑菌功能,改善腸黏膜屏障損傷和降低內(nèi)毒素相關(guān)并發(fā)癥。因此本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步探討膽汁內(nèi)、外引流術(shù)對(duì)OJ大鼠腸黏膜MUC2蛋白表達(dá)的影響及意義。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下:目的:探討膽汁內(nèi)、外引流術(shù)對(duì)OJ大鼠腸黏膜MUC2蛋白表達(dá)的影響及意義。方法:雄性sprague-dawley大鼠36只,體重約200-250g,隨機(jī)分成假手術(shù)組(shamoperation,sh),梗阻性黃疸組(obstructivejaundice,oj),膽汁內(nèi)引流組(internaldrainage,id)和膽汁外引流組(externaldrainage,ed)組。1手術(shù)造模過(guò)程第一次手術(shù):(1)sh組:開(kāi)腹后只做十二指腸牽拉,不結(jié)扎膽管;(2)oj組:開(kāi)腹后首先找到肝臟及十二指腸,在肝臟與十二指腸間找到膽總管(與肝門(mén)靜脈伴行),雙重結(jié)扎膽總管,中間離斷;(3)id組:操作同oj組;(4)ed組:操作同oj組;7天后行第二次手術(shù):(1)sh組:再次開(kāi)腹后,只做十二指腸牽拉,不做其他處理;(2)oj組:開(kāi)腹后可見(jiàn)膨大膽管,只做十二指腸牽拉,不做其他處理;(3)id組:開(kāi)腹后可見(jiàn)膨大的膽管,引流管一端插入膽管,縫線固定,另一端與十二指腸相通,荷包縫合固定;(4)ed組:開(kāi)腹后可見(jiàn)膨大的膽管,引流管一端插入膽管,縫線固定,另一端經(jīng)皮下引致頸背部縫線固定;2標(biāo)本留取:4組大鼠模型均于2次術(shù)后7天取材,留取下腔靜脈血2ml用于檢驗(yàn)內(nèi)毒素及肝功能,取距回盲瓣約10cm的小腸數(shù)段,常規(guī)he染色觀察腸黏膜病理形態(tài)學(xué)變化;電鏡下觀察腸黏膜超微結(jié)構(gòu)及杯狀細(xì)胞合成、分泌情況;阿爾辛藍(lán)-過(guò)碘酸雪夫氏(alcianblue/perioodicacidschiff,ab/pas)染色觀察陽(yáng)性染色杯狀細(xì)胞的分泌及黏液層厚度的改變情況;應(yīng)用免疫組化染色法(immunohistochemistry,ihc)測(cè)定muc2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1動(dòng)物一般狀態(tài)大體觀察:oj,id,ed組大鼠第一次手術(shù)行膽總管結(jié)扎后進(jìn)食進(jìn)水減少,耳部皮膚發(fā)黃,尿色變黃,運(yùn)動(dòng)減少;ed與id組大鼠第二次手術(shù)解除梗阻后進(jìn)食進(jìn)水增多,活動(dòng)增加,尿色逐漸變清亮、透明;oj組2次手術(shù)后(只牽拉十二指腸),皮膚毛色及尿液較前無(wú)明顯變化,進(jìn)食進(jìn)水及活動(dòng)進(jìn)一步減少,精神萎靡,體重減輕;sh組一般情況穩(wěn)定,未見(jiàn)明顯異常。2肝功能及內(nèi)毒素:oj組(0.93±0.28eu/ml)大鼠血清內(nèi)毒素水平明顯高于sh組(0.15±0.10eu/ml)(p0.01);id組(0.21±0.12eu/ml)和ed組(0.44±0.20eu/ml)血清內(nèi)毒素水平較oj組(0.93±0.28eu/ml)明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),且id組較ed組血清內(nèi)毒素水平降低更明顯,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);oj組tbil(107.72±18.22μmol/l)、alt(122.82±36.23u/l)、ast(409.48±73.06u/l)較sh組(21.46±3.45μmol/l)、(40.79±9.24u/l)、(88.72±29.31u/l)均顯著升高(p0.01);id組血清tbil(30.51±12.44μmol/l)、alt(56.79±19.66u/l)、ast(178.49±67.52u/l)和ed組血清tbil(35.89±15.57μmol/l)、alt(59.44±20.11u/l)、ast(109.09±38.06u/l)較oj組均明顯降低(p0.01);id組與ed組大鼠血清tbil、alt值無(wú)顯著性差異(p0.05),ed組血清ast較id組下降更明顯(p0.05)。3he染色示:sh組腸黏膜黏膜上皮完整,黏膜腺體及絨毛排列整齊,黏膜、黏膜下層及肌層等各層次清晰,伴少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn);oj組大鼠腸黏膜完整性破壞,腺體排列紊亂,腸絨毛短縮,變鈍,間隙增大,固有層大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),oj組chiu腸黏膜損傷評(píng)分(3.93±1.10)較sh組(0.28±0.40)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);oj組腸絨毛高度(175.14±65.38μm)較sh組(457.67±88.56μm)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。id組與ed組大鼠腸黏膜形態(tài)較oj組明顯改善,id組與ed組chiu腸黏膜損傷評(píng)分均明顯低于oj組(1.64±0.94),(2.81±0.75),(3.93±1.10)(p0.01),ed組chiu腸黏膜損傷評(píng)分高于id組(p0.05),id組和ed組腸絨毛高度(324.85±65.84μm),(291.63±66.36μm)相近(p=0.37),但兩組均明顯高于oj組(175.14±65.38μm),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。4ab-pas染色示:sh組杯狀細(xì)胞胞內(nèi)充滿紫紅色物質(zhì),ab-pas染色的平均光密度值(od0.43±0.06),腸道黏液層形態(tài)完整,厚度(316.5±52.32μm);oj組大鼠腸杯狀細(xì)胞胞內(nèi)被染成紫紅色物質(zhì)減少,黏液層變薄,破損,甚至缺失,oj組ab-pas染色的平均光密度值(od0.16±0.05)低于sh組(od0.43±0.06),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);oj組黏液層厚度(77.14±38.66μm)明顯低于SH組(316.50±52.32μm),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);ID組較OJ組大鼠AB-PAS染色的平均光密度值明顯增多(OD0.35±0.05),(OD 0.16±0.05)(p0.01),ID組腸道黏液層厚度(257.47±80.57μm)較OJ組(77.14±38.66μm)明顯增加(p0.01);ED組較OJ組AB-PAS染色的平均光密度值(OD 0.26±0.04),(OD 0.16±0.05)增高,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);ED組黏液層厚度(137.38±38.15μm)高于OJ組(77.14±38.66μm)(p0.05);ID組OD值高于ED組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),ID組黏液層厚度高于ED組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。5電鏡下可見(jiàn):SH組腸黏膜微絨毛排列整齊,杯狀細(xì)胞內(nèi)黏液顆粒飽滿。OJ組大鼠,腸黏膜微絨毛明顯稀疏、部分?jǐn)嗔?排列紊亂,部分杯狀細(xì)胞黏液顆粒稀少,出現(xiàn)空泡,ID組與ED組大鼠腸黏膜微絨毛整齊,可見(jiàn)杯狀細(xì)胞充滿粘液顆粒;胞內(nèi)黏液顆粒較OJ組增多。6免疫組化示:SH組大鼠腸黏膜MUC2蛋白被染成棕褐色,主要表達(dá)于腸絨毛杯狀細(xì)胞以及絨毛表面,SH組MUC2蛋白表達(dá)平均光密度值值(OD 0.46±0.03);OJ組腸絨毛被染成棕褐色杯狀細(xì)胞稀少,腸絨毛表面棕褐色物質(zhì)明顯減少,MUC2蛋白表達(dá)平均光密度值(OD 0.16±0.02)較SH組(OD 0.46±0.03)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);ID組(OD0.39±0.03)與ED組(OD 0.33±0.03)腸黏膜MUC2蛋白表達(dá)平均光密度值較OJ組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),且ID組MUC2蛋白表達(dá)平均光密度值要高于ED組,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:OJ大鼠存在腸黏膜屏障損傷,腸道黏液層破損、變薄,缺失,MUC2蛋白表達(dá)降低,杯狀細(xì)胞合成及分泌黏液減少,膽汁內(nèi)、外引流術(shù)均能改善腸黏膜屏障損傷,促進(jìn)MUC2蛋白表達(dá),促進(jìn)杯狀細(xì)胞合成和分泌黏液增加,修復(fù)、更新黏液層,且內(nèi)引流術(shù)優(yōu)于外引流術(shù)。
【關(guān)鍵詞】：梗阻性黃疸 膽總管結(jié)扎 膽汁內(nèi)外引流術(shù) 腸黏膜屏障 黏蛋白-2 杯狀細(xì)胞 黏液層
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R657.4
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫(xiě)12-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-29
• 附表29-30
• 討論30-32
• 小結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 綜述 腸道黏液層與腸黏膜免疫37-47
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 Jun Chen;Jia-Tian Dong;Xiao-Jing Li;Ye Gu;Zhi-Jian Cheng;Yuan-Kun Cai;;Glucagon-like peptide-2 protects impaired intestinal mucosal barriers in obstructive jaundice rats[J];World Journal of Gastroenterology;2015年02期

2 Zi-Kai Wang;Jian-Guo Xiao;Xue-Fei Huang;Yi-Chun Gong;Wen Li;;Effect of biliary drainage on inducible nitric oxide synthase, CD14 and TGR5 expression in obstructive jaundice rats[J];World Journal of Gastroenterology;2013年15期

  本文關(guān)鍵詞：膽汁內(nèi)外引流術(shù)對(duì)梗阻性黃疸大鼠腸黏膜MUC2蛋白表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：292263