【摘要】：目的:本文擬采用大鼠心臟缺血-再灌注模型,對(duì)mitoKATP正常、缺血、mitoKATP開(kāi)放與阻斷四種狀態(tài)心肌細(xì)胞miRNA和基因表達(dá)模式進(jìn)行分析,篩選和鑒定mitoKATP不同狀態(tài)下的特征miRNA;利用生物信息學(xué)等方法分析特征mi RNA介導(dǎo)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),獲得mitoKATP介導(dǎo)的抗MIRI與miRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò),為臨床預(yù)防和治療MIRI的研究提供新的理論依據(jù)。方法:標(biāo)準(zhǔn)健康SD大鼠,體重250-300克,予以戊巴比妥鈉對(duì)大鼠行腹腔注射麻醉,麻醉完成后將大鼠用平板固定,沿著肋骨邊緣迅速剪開(kāi)腹壁暴露膈肌后剪下心臟,建立大鼠離體心臟Langendorff灌注模型,將48只大鼠隨機(jī)分為4組:N組、I/R組、DZ組、5HD組,每組12只。N組:K-H液持續(xù)逆灌120min。I/R組:K-H液逆灌并平衡20min后,心肌缺血30min后,再?gòu)?fù)灌70min。DZ組:K-H液逆灌并平衡20min后,心肌缺血30min后,停灌末后立刻給予mitoK_(ATP)特異性開(kāi)放劑二氮嗪(Diazoxide,DZ)灌注5min。5HD組:K-H液逆灌平衡20min,心肌缺血25min后,停灌末立刻給予mitoK_(ATP)特異性阻滯劑五羥基葵酸(5-Hydroxy decanoic acid,5HD)灌注5min后再繼續(xù)給予二氮嗪灌注5min。上述分組除N組外,均在平衡20 min后調(diào)整冠脈流量使平均灌注壓維持在60~70 mmHg之間,于平衡末停灌,32℃全心缺血30 min后,繼續(xù)灌注37℃含氧K-H液70 min,使平均灌注壓維持在60~70 mmHg之間。檢測(cè)指標(biāo):(1)在平衡末和復(fù)灌末分別觀察和記錄各組心臟心功能指標(biāo);(2)在復(fù)灌末,用TTC染色檢測(cè)心肌梗死面積;(3)在復(fù)灌注末將左心室心肌組織取下迅速放入液氮中凍存,各組每4個(gè)心臟混合為一個(gè)樣本,即每組3個(gè)樣本。TRIzol法提取心肌總RNA。將12個(gè)樣本(4組×3個(gè)樣本/組)mRNA和miRNA碎片化處理后,構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)。Illumina測(cè)序平臺(tái)測(cè)序;(4)選取差異表達(dá)的miRNA,用qRT-PCR技術(shù)驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果可靠性;(5)通過(guò)Gene Ontology、KEGG Pathway等數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異基因所在的生物調(diào)控通路及網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果:(1)在再灌末,除HR外,LVDP、LVEDP、CF以及+dp/dtmax等指標(biāo)在各組間比較均有顯著差異。(2)與N組相比,I/R組的心肌梗死面積顯著增多(P0.05);DZ組心肌梗死面積比I/R組顯著降低(P0.05);5-HD組心肌梗死面積比DZ組顯著增多(P0.05)。(3)測(cè)序結(jié)果顯示,與N組比較,I/R組上調(diào)miRNA有192個(gè),下調(diào)的miRNA為77個(gè);與I/R組比較,DZ組上調(diào)的miRNA為118個(gè),下調(diào)的為48個(gè);與DZ組比較,5-HD組上調(diào)的miRNA為37個(gè),下調(diào)的為123個(gè)。(4)選取在各組間具有顯著性差異表達(dá)的且表達(dá)量高的17個(gè)miRNA,利用qRT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證,其中8個(gè)mi RNA的qRT-PCR結(jié)果同樣在各組間具有顯著性差異,分別為:rno-miR-328a-3p、rno-miR-676、rno-miR-128-3p、rno-miR-30c-5p、rno-miR-30d-5p、rno-miR-148a-3p、rno-miR-novel-chr5_59812、rno-mi R-novel-chr1-36162。(5)通過(guò)Gene Ontology、KEGGPathway等數(shù)據(jù)庫(kù)分析上述8個(gè)miRNA及可能調(diào)控的mRNA的調(diào)控通路及網(wǎng)絡(luò)。結(jié)論:(1)二氮嗪后處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用,使用5-HD處理后會(huì)使心肌缺血再灌注損傷加重,結(jié)果顯示mitoK_(ATP)通道在心肌缺血再灌注損傷中十分重要;(2)通過(guò)測(cè)序技術(shù)及qRT-PCR方法,選出9個(gè)候選mi RNA,其中miR-128、miR-328a-3p、miR30d-5p、miR-30c以及miR-676、mi R-361可能參與調(diào)控mitoKATP通道對(duì)心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R614
【圖文】：

121.3.3 不同分組灌注方法（圖 1）圖1 各組離體心臟灌流示意圖（1）N組： K-H液灌注平衡20min后，繼續(xù)K-H液灌注100min；（2）I/R組： K-H液灌注平衡20min后，停灌30min，再?gòu)?fù)灌70min；（3）DZ組： K-H液灌注平衡20min后，停灌30min，于再灌注開(kāi)始即刻，主動(dòng)脈逆灌50μM二氮嗪 5 min，再?gòu)?fù)灌65min；（4）5-HD組：K-H液灌注平衡20min后，停灌25min

各組在平衡末及再灌末心功能的比較統(tǒng)計(jì)圖

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 聶 佳2.2 心臟梗死面積的比較2.2.1 和正常組相比，缺血組的心肌梗死面積顯著增大（P＜0.05）；保護(hù)組心肌梗死面積相比缺血組顯著減小（P＜0.05）；阻斷組心肌梗死面積相對(duì)保護(hù)組顯著增大（P＜0.05）。（見(jiàn)圖 3、圖 4 及表 4）
【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 Mateus Antunes Nogueira;Ana Maria Mendona Coelho;Sandra Nassa Sampietre;Rosely Antunes Patzina;Fabiano Pinheiro da Silva;Luiz Augusto Carneiro D'Albuquerque;Marcel Cerqueira Cesar Machado;;Beneficial effects of adenosine triphosphate-sensitive K~+ channel opener on liver ischemia/reperfusion injury[J];World Journal of Gastroenterology;2014年41期

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7 陳其彬;喻田;傅小云;劉興奎;張瓊;余志豪;;二氮嗪預(yù)處理對(duì)大鼠離體心臟缺血再灌注時(shí)心肌線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的影響[J];中華麻醉學(xué)雜志;2008年01期

本文編號(hào)：2875506