【摘要】：目的:本文擬采用大鼠心臟缺血-再灌注模型,對mitoKATP正常、缺血、mitoKATP開放與阻斷四種狀態(tài)心肌細胞miRNA和基因表達模式進行分析,篩選和鑒定mitoKATP不同狀態(tài)下的特征miRNA;利用生物信息學等方法分析特征mi RNA介導的調(diào)控網(wǎng)絡及其關鍵節(jié)點,獲得mitoKATP介導的抗MIRI與miRNA調(diào)控網(wǎng)絡,為臨床預防和治療MIRI的研究提供新的理論依據(jù)。方法:標準健康SD大鼠,體重250-300克,予以戊巴比妥鈉對大鼠行腹腔注射麻醉,麻醉完成后將大鼠用平板固定,沿著肋骨邊緣迅速剪開腹壁暴露膈肌后剪下心臟,建立大鼠離體心臟Langendorff灌注模型,將48只大鼠隨機分為4組:N組、I/R組、DZ組、5HD組,每組12只。N組:K-H液持續(xù)逆灌120min。I/R組:K-H液逆灌并平衡20min后,心肌缺血30min后,再復灌70min。DZ組:K-H液逆灌并平衡20min后,心肌缺血30min后,停灌末后立刻給予mitoK_(ATP)特異性開放劑二氮嗪(Diazoxide,DZ)灌注5min。5HD組:K-H液逆灌平衡20min,心肌缺血25min后,停灌末立刻給予mitoK_(ATP)特異性阻滯劑五羥基葵酸(5-Hydroxy decanoic acid,5HD)灌注5min后再繼續(xù)給予二氮嗪灌注5min。上述分組除N組外,均在平衡20 min后調(diào)整冠脈流量使平均灌注壓維持在60~70 mmHg之間,于平衡末停灌,32℃全心缺血30 min后,繼續(xù)灌注37℃含氧K-H液70 min,使平均灌注壓維持在60~70 mmHg之間。檢測指標:(1)在平衡末和復灌末分別觀察和記錄各組心臟心功能指標;(2)在復灌末,用TTC染色檢測心肌梗死面積;(3)在復灌注末將左心室心肌組織取下迅速放入液氮中凍存,各組每4個心臟混合為一個樣本,即每組3個樣本。TRIzol法提取心肌總RNA。將12個樣本(4組×3個樣本/組)mRNA和miRNA碎片化處理后,構(gòu)建測序文庫。Illumina測序平臺測序;(4)選取差異表達的miRNA,用qRT-PCR技術驗證測序結(jié)果可靠性;(5)通過Gene Ontology、KEGG Pathway等數(shù)據(jù)庫分析差異基因所在的生物調(diào)控通路及網(wǎng)絡。結(jié)果:(1)在再灌末,除HR外,LVDP、LVEDP、CF以及+dp/dtmax等指標在各組間比較均有顯著差異。(2)與N組相比,I/R組的心肌梗死面積顯著增多(P0.05);DZ組心肌梗死面積比I/R組顯著降低(P0.05);5-HD組心肌梗死面積比DZ組顯著增多(P0.05)。(3)測序結(jié)果顯示,與N組比較,I/R組上調(diào)miRNA有192個,下調(diào)的miRNA為77個;與I/R組比較,DZ組上調(diào)的miRNA為118個,下調(diào)的為48個;與DZ組比較,5-HD組上調(diào)的miRNA為37個,下調(diào)的為123個。(4)選取在各組間具有顯著性差異表達的且表達量高的17個miRNA,利用qRT-PCR進行驗證,其中8個mi RNA的qRT-PCR結(jié)果同樣在各組間具有顯著性差異,分別為:rno-miR-328a-3p、rno-miR-676、rno-miR-128-3p、rno-miR-30c-5p、rno-miR-30d-5p、rno-miR-148a-3p、rno-miR-novel-chr5_59812、rno-mi R-novel-chr1-36162。(5)通過Gene Ontology、KEGGPathway等數(shù)據(jù)庫分析上述8個miRNA及可能調(diào)控的mRNA的調(diào)控通路及網(wǎng)絡。結(jié)論:(1)二氮嗪后處理對心肌缺血再灌注損傷具有保護作用,使用5-HD處理后會使心肌缺血再灌注損傷加重,結(jié)果顯示mitoK_(ATP)通道在心肌缺血再灌注損傷中十分重要;(2)通過測序技術及qRT-PCR方法,選出9個候選mi RNA,其中miR-128、miR-328a-3p、miR30d-5p、miR-30c以及miR-676、mi R-361可能參與調(diào)控mitoKATP通道對心肌缺血再灌注損傷的作用機制。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R614
【圖文】：

121.3.3 不同分組灌注方法（圖 1）圖1 各組離體心臟灌流示意圖（1）N組： K-H液灌注平衡20min后，繼續(xù)K-H液灌注100min；（2）I/R組： K-H液灌注平衡20min后，停灌30min，再復灌70min；（3）DZ組： K-H液灌注平衡20min后，停灌30min，于再灌注開始即刻，主動脈逆灌50μM二氮嗪 5 min，再復灌65min；（4）5-HD組：K-H液灌注平衡20min后，停灌25min

各組在平衡末及再灌末心功能的比較統(tǒng)計圖

遵義醫(yī)學院碩士學位論文 聶 佳2.2 心臟梗死面積的比較2.2.1 和正常組相比，缺血組的心肌梗死面積顯著增大（P＜0.05）；保護組心肌梗死面積相比缺血組顯著減小（P＜0.05）；阻斷組心肌梗死面積相對保護組顯著增大（P＜0.05）。（見圖 3、圖 4 及表 4）
【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：2875506