目的探討粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)對(duì)急性脊髓損傷(Acute spinal cord injury,ASCI)大鼠脊髓組織中Nogo-A蛋白表達(dá)的影響。方法本實(shí)驗(yàn)采用自制的Allen's打擊器制作大鼠T9節(jié)段急性脊髓損傷模型。48只體重(190-210)g SD大鼠隨機(jī)分為單純椎板切除組(正常組)、脊髓損傷組(對(duì)照組)和脊髓損傷后G-CSF治療組(治療組),每組16只;治療組在損傷后早期給予G-CSF頸部皮下注射,正常組及對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)予以相同劑量的生理鹽水注射。分別于術(shù)后第1、3、7、14天處死動(dòng)物、心臟插管多聚甲醛灌注固定、取打擊受損脊髓節(jié)段做成組織切片。術(shù)后每天對(duì)三組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能行Basso Beattie Bresnahan(BBB)評(píng)分直至處死。用H-E染色法觀察受損脊髓組織的形態(tài)學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色法觀察受損脊髓組織中Nogo-A蛋白在各時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)表達(dá)特征,高清晰病理圖文管理系統(tǒng)測(cè)量脊髓組織中Nogo-A蛋白的平均光密度數(shù)值;Western-blot(蛋白印跡)法測(cè)定各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)脊髓組織中Nogo-A蛋白的表達(dá)量,并與正常組相比較。結(jié)果1.BBB評(píng)分治療組和對(duì)照組大鼠后肢在術(shù)后均呈現(xiàn)遲緩性癱瘓狀態(tài),前3天兩組大鼠后肢仍有明顯運(yùn)動(dòng)功能障礙;術(shù)后第7天、14天,兩組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能明顯提高,且治療組大鼠后肢BBB評(píng)分明顯優(yōu)于照組大鼠(p0.05)。2.HE染色鏡觀,治療組和對(duì)照組大鼠脊髓組織在損傷后均有不同程度的結(jié)構(gòu)紊亂,表現(xiàn)為神經(jīng)元細(xì)胞水腫、出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等;隨后,神經(jīng)元纖維逐漸斷裂、壞死,神經(jīng)元細(xì)胞空泡樣變性、凋亡。與對(duì)照組不同,G-CSF治療組大鼠的神經(jīng)元細(xì)胞損傷區(qū)域局灶性出血,殘留神經(jīng)元數(shù)量較對(duì)照組多,仍可見(jiàn)排列整齊的殘留神經(jīng)元纖維,未見(jiàn)大面積空泡出現(xiàn),局部少量小膠質(zhì)細(xì)胞增生,神經(jīng)元?dú)埩艚Y(jié)構(gòu)較對(duì)照組完整。3.免疫組化染色三組大鼠的脊髓組織中均能見(jiàn)到Nogo-A蛋白表達(dá)。單純椎板切除組大鼠脊髓組織中的Nogo-A蛋白僅少量存在,表達(dá)量顯著低于G-CSF治療組和對(duì)照組大鼠(p0.05)。Nogo-A蛋白表達(dá)量在損傷后第7天達(dá)峰值,之后逐漸下降,其表達(dá)強(qiáng)度呈現(xiàn)出第7天第14天第3天第1天的特點(diǎn);在各相同時(shí)間點(diǎn),G-CSF治療組脊髓組織中Nogo-A蛋白的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組大鼠(p0.05)。4.Western-blot結(jié)果單純椎板切除組脊髓組織中Nogo-A蛋白表達(dá)量在損傷后各時(shí)間點(diǎn)相對(duì)恒定,治療組和對(duì)照組脊髓組織中Nogo-A蛋白表達(dá)量則波動(dòng)明顯,在損傷后第7天達(dá)峰值,之后逐漸下降,其表達(dá)強(qiáng)度呈現(xiàn)出先揚(yáng)后抑的特點(diǎn)。術(shù)后第1天、第3天、第7天、第14天,治療組大鼠脊髓組織中Nogo-A蛋白的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組大鼠(p0.01)。結(jié)論1.大鼠急性脊髓損傷后脊髓組織中Nogo-A蛋白較正常大鼠明顯升高,其表達(dá)強(qiáng)度呈現(xiàn)出第7天第14天第3天第1天的特點(diǎn)。2.粒細(xì)胞集落刺激因子可能抑制了急性脊髓損傷后大鼠脊髓組織中Nogo-A蛋白的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R651.2
【部分圖文】：

速拿離撞擊針，致傷勢(shì)能為10g×25mm，造成大鼠脊髓損傷。A：椎管打開(kāi)后顯露的正常脊髓 B：打擊后迅速充血水腫的脊髓圖2.1 造模前后脊髓外觀變化AB

注：A:治療組第1天 B：治療組第3天 C：治療組第7天 D：治療組第14天E:對(duì)照組第1天 F：對(duì)照組第3天 G：對(duì)照組第7天 H：對(duì)照組第14天圖3.2 治療組和對(duì)照組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)（HE染色，×400）ABCE F GHD

2.1.2 正常組：大鼠脊髓結(jié)構(gòu)清晰，光鏡下可見(jiàn)白質(zhì)、灰質(zhì)和灰質(zhì)中的前角與后角以及脊髓中央管；灰質(zhì)白質(zhì)分界清楚。白質(zhì)無(wú)水腫，見(jiàn)到排列整齊的條狀神經(jīng)纖維，灰質(zhì)中見(jiàn)神經(jīng)元胞體、樹(shù)突、大量少突膠質(zhì)細(xì)胞和無(wú)髓神經(jīng)纖維包繞，灰質(zhì)前角中見(jiàn)大量成群分布的前角運(yùn)動(dòng)細(xì)胞，后角中見(jiàn)少量、散列排列的神經(jīng)細(xì)胞，脊髓中央見(jiàn)脊髓中央管，周?chē)M織無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)呈多邊形的神經(jīng)元胞體，核居中，無(wú)細(xì)胞水腫、出血等病理變化，結(jié)果詳見(jiàn)(圖 3.3)。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2870232