目的:全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)BMSCs,構(gòu)建大鼠尾椎間盤退變模型,觀察脊伸痹通方聯(lián)合BMSCs移植對退變椎間盤修復(fù)及CXCR4、NF-κB表達(dá)的影響。方法:從大鼠股骨骨髓中提取BMSCs,全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)至P3代,通過形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測、增殖情況觀測對其鑒定,液氮中凍存以待后續(xù)移植使用。采用經(jīng)皮纖維環(huán)穿刺法制造大鼠尾椎間盤退變模型,磁共振動態(tài)檢測其退變情況。選取50只處于同一退變程度的造模大鼠,將其隨機(jī)分成5組。具體干預(yù)方法為:A組:尾靜脈BMSCs移植+高劑量“脊伸痹通方”中藥湯劑灌胃;B組:尾靜脈BMSCs移植+中劑量“脊伸痹通方”中藥湯劑灌胃;C組:尾靜脈BMSCs移植+低劑量“脊伸痹通方”中藥湯劑灌胃;D組:尾靜脈BMSCs移植+等體積純水灌胃;E組:尾靜脈PBS液注射+純水灌胃。干預(yù)1月后復(fù)查磁共振,聯(lián)合HE染色觀察退變椎間盤修復(fù)情況。ELISA法檢測血清、椎間盤中CXCR4、NF-κB的表達(dá)情況。結(jié)果:全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)的大鼠P3代BMSCs,形態(tài)學(xué)觀察顯示其結(jié)構(gòu)均一性較高,有較強的增殖能力。通過流式細(xì)胞技術(shù),對于經(jīng)典的細(xì)胞表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定,證實為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。經(jīng)皮纖維環(huán)穿刺法制造的大鼠尾椎間盤退變多為改良Thompson分級Ⅲ級。治療1月后,經(jīng)磁共振檢測及HE染色得知,脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠有效延緩大鼠尾椎間盤退變,且較單純骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植效果更好。各組動物椎間盤、血清中均有CXCR4、NF-κB表達(dá)。同一組的血清中CXCR4、NF-κB含量顯著高于椎間盤中的含量(p0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;經(jīng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的A～D組各組的CXCR4、NF-κB表達(dá)顯著高于空白對照的E組(p0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療的高劑量組(A組)、中劑量組(B組)以及低劑量組(C組)均可促進(jìn)CXCR4、NF-κB的表達(dá),且呈濃度依賴性。結(jié)論:全骨髓貼壁法能夠培養(yǎng)出純度較高、增殖良好的P3代BMSCs。經(jīng)皮纖維環(huán)穿刺法制造的大鼠尾椎間盤退變模型操作簡單、損傷小、造模成功率高、可行性強。磁共振具有安全、無輻射、無骨偽影、對比度高等優(yōu)點,可用于動物椎間盤退變相關(guān)性疾病的檢測。結(jié)合組織學(xué)染色技術(shù),能夠更加客觀的進(jìn)行椎間盤退變程度評估。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠延緩椎間盤退變,聯(lián)合脊伸痹通方可提高其修復(fù)能力,脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)椎間盤退變的機(jī)制可能與上調(diào)CXCR4、NF-κB的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R681.5
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 理論研究
    1. 祖國醫(yī)學(xué)對椎間盤退變的認(rèn)識
    2. 祖國醫(yī)學(xué)對椎間盤退變的治療
    3. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對椎間盤退變的研究
        3.1 流行病學(xué)
        3.2 病因及發(fā)病機(jī)制
        3.3 現(xiàn)代治療進(jìn)展
    4. CXCR4、NF-κB與椎間盤退變的關(guān)系
    5. 脊伸痹通方的組方特點及治療經(jīng)驗
第2章 實驗研究
    1. 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備及鑒定
        1.1 實驗材料和方法
        1.2 實驗步驟
        1.3 實驗結(jié)果
        1.4 討論
    2. 經(jīng)皮穿刺大鼠尾椎間盤退變模型的建立
        2.1 實驗材料和方法
        2.2 實驗步驟
        2.3 實驗結(jié)果
        2.4 討論
    3. 脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對退變椎間盤修復(fù)的影響
        3.1 實驗材料和方法
        3.2 實驗步驟
        3.3 實驗結(jié)果
        3.4 討論
    4. 脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對椎間盤、血清CXCR4、NF-κB表達(dá)的影響
        4.1 實驗材料和方法
        4.2 實驗步驟
        4.3 統(tǒng)計學(xué)分析
        4.4 討論
第3章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝

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