目的:通過構建SD大鼠右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯(SGB)模型、SD大鼠心臟不停跳體外循環(huán)(CPB)模型、SD大鼠術前右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯模型聯(lián)合心臟不停跳體外循環(huán)模型(CPB+SGB),成功構建模型后,以此來檢測術前進行右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯技術,對心臟不停跳條件下的體外循環(huán)SD大鼠海馬組織的各種作用效果,并進行相關炎癥通路和凋亡通路的機制研究,以期能為臨床上星狀神經(jīng)節(jié)阻滯技術應用于體外循環(huán)起到指導作用,并為該技術對體外循環(huán)下的腦組織起到的保護效果,提供較為實用且可靠的相關理論依據(jù)。方法:認真挑選SPF級成年雄性SD大鼠24只,體重測量值在350g左右,將上述24只SD大鼠進行隨機分組,分為4組,包括:假手術組(S組),單純進行右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯模型組(SGB組),單純進行心臟不停跳體外循環(huán)模型組(CPB組),術前成功右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯聯(lián)合心臟不停跳體外循環(huán)模型組(CPB+SGB組),四組分別有6只。淺麻醉后,CPB+SGB組和SGB組構建右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯模型,隨后加深麻醉;CPB組和S組則進行正常麻醉。在上述操作之后,以上四組都進行SD大鼠的右側頸靜脈與雙下側股動脈穿刺并置留置管,接著做以下幾步:CPB組和CPB+SGB組成功進行心臟不停跳的體外循環(huán),兩個小時后停止實驗;而S組和SGB組只需進行嚴密觀測,兩個小時后停止實驗。實驗過程中嚴密監(jiān)測并記錄大鼠的呼吸頻率、四肢皮膚顏色、心率、脈搏、血壓、疼痛、血氧、瞳孔和角膜反射的改變等生命體征。實驗結束,快速分離大鼠大腦海馬組織,取一部分海馬組織用中性甲醛溶液固定后石蠟包埋切片,行HE染色后查察大鼠海馬組織的病理學改變,用免疫組化法定性測驗大鼠海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白的表達;另外取一部分-80℃保存?zhèn)溆糜谀孓D(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測Caspase-3基因的表達;再取一部分-80℃保存?zhèn)溆糜赪estern blot(WB)法檢測Caspase-3蛋白的表達。最后選擇其中一部分用電鏡觀察其海馬神經(jīng)元超微結構的改變。結果:成功構建大鼠單純右側星狀神經(jīng)節(jié)阻滯模型、大鼠單純心臟不停跳體外循環(huán)模型、大鼠術前右側星狀神經(jīng)節(jié)阻聯(lián)合心臟不停跳體外循環(huán)模型。HE結果顯示:通過光學顯微鏡的鏡頭,可觀測到S組和SGB組海馬CA1區(qū)細胞形態(tài)正常,神經(jīng)元基本結構均沒有發(fā)生變化,細胞群的排列大部分較為整齊,細胞膜以及內(nèi)部細胞器構造較為完整,細胞核的核仁清晰可見無變化,細胞核周圍的細胞器較多且結構正常;CPB組和CPB+SGB組海馬神經(jīng)元細胞超微結構可見明顯損傷,海馬神經(jīng)元細胞發(fā)生腫脹,細胞間排列紊亂,胞核與胞膜之間的界限不清,細胞核核仁溶解消失,細胞核出現(xiàn)核固縮,細胞核周圍的細胞器明顯減少,出現(xiàn)明顯的海馬神經(jīng)元細胞凋亡現(xiàn)象;與CPB組比較,CPB+SGB組出現(xiàn)的各種損傷程度均相對減輕。ELISA結果顯示:與S組比較,CPB組和CPB+SGB組的血漿TNF-α、IL-6濃度水平在T1、T2時點均發(fā)生了明顯升高(P0.05);與CPB組比較,CPB+SGB組血漿TNF-α、IL-6濃度在T1、T2時點明顯降低(P0.05)。免疫組化結果顯示:與S組比較,CPB組、CPB+SGB組Bax蛋白表達量明顯增加(P0.05);與CPB組比較,CPB+SGB組Bax蛋白表達量明顯減少(P0.05),Bcl-2蛋白表達量明顯增加(P0.05)。PCR結果顯示:與S組比較,CPB組、CPB+SGB組Caspase-3 mRNA表達量明顯增加(P0.05);與CPB組比較,CPB+SGB組Caspase-3 mRNA表達量明顯減少(P0.05)。WB結果顯示:與S組比較,CPB組、CPB+SGB組Caspase-3蛋白表達量明顯增加(P0.05);與CPB組比較,CPB+SGB組Caspase-3蛋白表達量明顯減少(P0.05)。結論:體外循環(huán)可引起海馬組織凋亡增多,導致大鼠腦損傷;星狀神經(jīng)節(jié)阻滯可降低血漿TNF-α、IL-6濃度,從而調(diào)節(jié)機體的炎癥反應,并通過下調(diào)Bax、上調(diào)Bcl-2的表達水平,導致Caspase-3的蛋白表達減少,進而減少海馬組織的細胞凋亡,最終對心臟不停跳條件下的體外循環(huán)大鼠的腦組織起到一定程度的保護作用。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

SGB后的大鼠Figure1TheratafterSGB

人工肺體外循環(huán)模型示意圖

節(jié)阻滯對體外循環(huán)下大鼠凋亡通路相關蛋白及炎癥因子表達的影響 2018表 2 各組大鼠不同時點血漿 TNF-α濃度（pg/ml, ±s))Table 2 Concentration of plasma TNF-α at each time in each group(pg/ml, ±組別 T0 T1 T2S 組 1.82±0.30 1.83±0.34 2.00±SGB 組 1.81±0.33 1.85±0.35 2.01±CPB 組 2.29±0.39 3.98±0.56ac4.78±PB+SGB 組 1.90±0.37 2.56±0.48abc3.36± S 組比較，aP＜0.05；與 CPB 組比較，bP＜0.05；與 T0 比較，cP＜0.05；與 5
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本文編號：2854494