目的:通過研究上調(diào)骨肉瘤細胞株MG-63中的mi RNA34a表達水平,探究其對下游的靶基因-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1基因(DNMT1)及其骨肉瘤細胞凋亡和增殖的影響,為骨肉瘤生物學基因靶向治療開辟新思路和奠定實驗基礎。方法:實驗分為三組:A組:空白組(未處理組);B組:陰性對照組(轉(zhuǎn)染陰性質(zhì)粒);C組:實驗組(轉(zhuǎn)染組)。利用慢病毒構建能夠穩(wěn)定表達mi RNA34a的轉(zhuǎn)染質(zhì)粒:pc DNA3.1/pri-mi RNA34a,成功轉(zhuǎn)染實驗組骨肉瘤細胞株,培養(yǎng)生長良好并能穩(wěn)定表達的細胞株。同樣,利用慢病毒陰性質(zhì)粒(pc DNA3.1)處理陰性對照組�？瞻捉M細胞株不予以處理。采用實時熒光定量PCR,檢測轉(zhuǎn)染前后三組細胞中DNMT1m RNA變化情況。Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染前后三組細胞蛋白表達水平的變化。利用流式細胞術法對細胞周期變化、細胞增殖以及細胞凋亡情況進行檢測并分析。結果:轉(zhuǎn)染滿意后,對三組細胞株的實驗數(shù)據(jù)進行比對分析。在實驗組中的DNMT1 m RNA相對表達水平(0.26±0.04)顯著低于陰性對照組(1.02±0.15)和空白對照組(1.05±0.06),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);實驗組中的DNMT1蛋白表達量較對照組明顯下降(P0.05);骨肉瘤細胞的增殖受到抑制,實驗組轉(zhuǎn)染后第5天增殖抑制率達28.2±1.69%;實驗組細胞在G0/G1期的細胞比率高達71.58±0.96%,顯著高于空白對照組(62.99±0.67%)和陰性對照組(63.54±1.33%)(P0.05);細胞凋亡明顯增強,實驗組細胞的凋亡率為28.20%,顯著高于空白對照組(5.06%)和陰性對照組(5.34%)的細胞凋亡率(P0.05)。結論:骨肉瘤MG-63細胞株轉(zhuǎn)染pc DNA3.1/pri-mi RNA34a質(zhì)粒后,增強了mi RNA34a的表達,降低了下游DNMT1基因m RNA及蛋白的表達水平,促進了骨肉瘤細胞凋亡,對骨肉瘤細胞的增殖產(chǎn)生了抑制作用。mi RNA34a為骨肉瘤在分子生物學領域的基因靶向診療開辟了新思路。
【學位單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R738.1
【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
材料與方法
實驗結果
討論
參考文獻
文獻綜述
    綜述參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄
個人簡歷
開題、中期及學位論文答辯委員組成

【參考文獻】

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1 宋亮;劉慶春;鐘志凱;劉德傳;;骨肉瘤基因治療及載體系統(tǒng)研究現(xiàn)狀[J];臨床軍醫(yī)雜志;2008年04期

本文編號：2847040