目的:觀察Pokemon沉默對(duì)人乳腺癌細(xì)胞RFC4表達(dá)的影響,并分析兩者在臨床表達(dá)中的相關(guān)性。方法:以體外培養(yǎng)的人乳腺癌MDA-MB-231、HS578T、MCF-7、T-47D四個(gè)細(xì)胞系為研究對(duì)象,按照Pokemon序列設(shè)計(jì)特異性si RNA,將si RNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至乳腺癌細(xì)胞內(nèi),通過q RT-PCR方法從m RNA轉(zhuǎn)錄水平研究沉默Pokemon對(duì)RFC4表達(dá)的影響,通過蛋白免疫印跡法從蛋白水平檢測(cè)沉默Pokemon對(duì)RFC4表達(dá)的影響。應(yīng)用組織芯片結(jié)合免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)100例乳腺非特殊性浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Pokemon與RFC4的表達(dá)情況,分析二者在臨床表達(dá)中的相關(guān)性。結(jié)果:Pokemon沉默對(duì)乳腺癌細(xì)胞中RFC4的影響:采用si RNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染沉默MDA-MB-231、HS578T、MCF-7、T-47D四個(gè)細(xì)胞系中的Pokemon表達(dá)后,RFC4的m RNA表達(dá)水平下調(diào),說明沉默Pokemon能從m RNA轉(zhuǎn)錄水平上抑制RFC4的表達(dá)。采用si RNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染沉默MDA-MB-231、HS578T、MCF-7、T-47D四個(gè)細(xì)胞系中的Pokemon后,RFC4的蛋白表達(dá)水平下調(diào),說明沉默Pokemon能從蛋白水平上抑制RFC4的表達(dá)。Pokemon與RFC4在臨床表達(dá)中的相關(guān)性:通過對(duì)100例人乳腺癌組織(非特殊性浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌)進(jìn)行免疫組化分析,結(jié)果顯示Pokemon與RFC4表達(dá)存在著相關(guān)性,隨著Pokemon的表達(dá)增加,RFC4的陽(yáng)性表達(dá)率也增加,Pokemon的表達(dá)與RFC4的升高呈明顯正相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?結(jié)論:1)沉默Pokemon可抑制乳腺癌細(xì)胞RFC4的m RNA及蛋白表達(dá)水平。2)在乳腺癌組織中Pokemon與RFC4的表達(dá)呈正相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

18T-47D圖 1 沉默 Pokemon 基因抑制乳腺癌細(xì)胞中 RFC4 mRNA 的表達(dá)注：con 組：陰性對(duì)照組，siRNA 組：pokemon 沉默組，n=3，*P < 0.05，**p<0.01，***p<0.0014.1.2 沉默 Pokemon 抑制人乳腺癌細(xì)胞中 RFC4 蛋白水平的表達(dá)為了驗(yàn)證沉默 Pokemon 對(duì)乳腺癌細(xì)胞 RFC4 蛋白表達(dá)的影響，先瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pokemon-siRNA 分別入 MDA-MB-231、HS578T、MCF-7、T-47D 細(xì)胞，48h 后，再通過蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)，結(jié)果顯示：低表達(dá) Pokemon 的乳腺癌細(xì)胞 RFC4 蛋白表達(dá)

圖 2 沉默 Pokemon 基因抑制乳腺癌細(xì)胞 RFC4 蛋白的表達(dá)2 Pokemon 與 RFC4 在乳腺癌組織中蛋白表達(dá)的相關(guān)性）Pokemon 及 RFC4 在乳腺癌組織中的表達(dá)為了觀察 Pokemon、RFC4 在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，收集 100 例非特性導(dǎo)管癌組織及 10 例邊緣組織芯片（編號(hào) BC081120b）,運(yùn)用免疫組織法觀察了 100 例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織，依據(jù)細(xì)胞顯色強(qiáng)度評(píng)定為陰性（色；弱陽(yáng)性（+）：淺棕色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)處于 25%以下；陽(yáng)性（++）：細(xì)胞數(shù)處于 25%-49%之間；強(qiáng)陽(yáng)性（+++）：棕褐色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)處于。結(jié)果顯示：99 例乳腺癌組織標(biāo)本中，Pokemon 陽(yáng)性表達(dá)率為 94.9%(9 陽(yáng)性表達(dá)率為 96.0%（95/99）。Pokemon 在乳腺癌組織中的典型陽(yáng)

圖 3 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中 pokemon、RFC4 的表達(dá)（免疫組化，200×）注：圖 3B、3C 分別為一名 34 歲女性乳腺癌患者乳腺組織中的 Pokemon、RFC4 的表達(dá)，呈強(qiáng)陽(yáng)性（+++）表達(dá)，圖 3E、3F 分別為一名 46 歲女性乳腺癌患者乳腺組織中的 Pokemon、RFC4 的表達(dá)，呈弱陽(yáng)性表達(dá)（+）。
【參考文獻(xiàn)】

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1 劉鑫遠(yuǎn);禹亮;張健;王磊;;Pokemon及其在腫瘤中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年03期

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本文編號(hào)：2835621