發(fā)布時間：2020-09-28 10:32

　　 研究背景骨肉瘤是最常見的骨原發(fā)性惡性腫瘤,好發(fā)于青少年,惡性程度極高,早期即可發(fā)生轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差。發(fā)病率隨年齡而改變,呈雙峰分布,第一個發(fā)病高峰是10-20歲的青少年時期,另一高峰出現(xiàn)在65歲以上的老年人群。普遍認為男性骨肉瘤發(fā)病率較女性高。骨肉瘤多發(fā)于骨端,一般為股骨下端或脛骨上端,其次為肱骨上端,其他部位較少見。多數(shù)為溶骨性,也有少數(shù)為成骨性。骨肉瘤含有不同成份的軟骨、纖維組織及生骨組織。該腫瘤的共同特點是形成不成熟的骨樣組織,或稱為類骨質(zhì)(腫瘤性骨),其惡性程度及其轉(zhuǎn)移或擴散的傾向,主要取決于組織病理學(xué)分級。顯微鏡下可見許多瘤細胞、細胞及細胞核大小,形狀不一,有小型多核巨細胞、梭形細胞、不成熟的軟骨細胞及惡性成骨細胞,細胞核大,染色深。有些骨肉瘤能夠通過單純的外科手術(shù)進行治愈,但大多數(shù)骨肉瘤具有局部侵襲迅速、發(fā)生肺轉(zhuǎn)移早的特點。近25年來,骨肉瘤的治療有了長足的發(fā)展,但仍有半數(shù)以上的患者死于骨肉瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。雖然骨肉瘤的發(fā)病機制尚未明了,但是越來越多的研究證實基因突變在骨肉瘤的病因中發(fā)揮著重要作用。對骨肉瘤的發(fā)生和發(fā)展分子機制進行研究,有助于提高對腫瘤機制的認識,促進早期篩查和治療研究的深入�；蚨鄳B(tài)性(Geneticpolymorphisms)是指在一個生物群體中,同時和經(jīng)常存在有兩個或多個不連續(xù)的變異或基因型或等位基因,可導(dǎo)致生物繁殖過程中轉(zhuǎn)錄和翻譯的多樣性選擇,又稱為遺傳多態(tài)性或多態(tài)性�；蚨鄳B(tài)性既可以保持遺傳密碼一定的準確性,又有一定的寬容度,對于維持生物界的穩(wěn)態(tài)和多樣化具有非常重要的意義。其中單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotide Polymorphism,SNP)是人類可遺傳變異中最常見的一種,占已明確的多態(tài)性的百分之九十以上。從本質(zhì)來說,多態(tài)性的產(chǎn)生在于基因水平上的變異,一般發(fā)生在基因序列中不編碼蛋白的區(qū)域和不發(fā)揮主要調(diào)控功能的基因序列中。其中,位于啟動子區(qū)域的單核苷酸多態(tài)可以改變基因的轉(zhuǎn)錄與表達,導(dǎo)致該基因表達的上調(diào)或者抑制,這也是生物群體進化過程中表型復(fù)雜多樣的遺傳學(xué)基礎(chǔ);5'非翻譯區(qū)(5'-Untranslated Regions,5'-UTR)在堿基位置上部分重疊于啟動子區(qū)域,故也參與基因轉(zhuǎn)錄表達的調(diào)控;3'非翻譯區(qū)(3'-UntranslatedRegions,3'-UTR)和內(nèi)含子的單核苷酸多態(tài)可導(dǎo)致mRNA的剪切和拼接錯誤,產(chǎn)生異常的mRNA影響基因的表達。SNP具有數(shù)量多分布廣、遺傳穩(wěn)定性強、表型差異大以及易快速規(guī)�；Y查等優(yōu)點。SNP有助于解釋個體的表型差異、對疾病的易感性、對各種藥物的耐受性以及對環(huán)境因子的反應(yīng),現(xiàn)己在復(fù)雜疾病,如惡性腫瘤的遺傳易感性、耐藥性等領(lǐng)域的研究中得到廣泛應(yīng)用。SNP既可以通過改變蛋白質(zhì)編碼區(qū)基因序列改變編碼氨基酸序列發(fā)揮作用,也可以通過改變調(diào)控區(qū)的基因表達影響蛋白質(zhì)的表達或功能活性。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是受多種因素綜合影響的產(chǎn)物。眾多研究報告顯示,基因多態(tài)性與骨肉瘤患者的遺傳易感性和預(yù)后緊密相關(guān)。已有研究證實,星形細胞上調(diào)基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)也被稱為轉(zhuǎn)移黏附因子(metadherin,MTDH)是一個新近發(fā)現(xiàn)的重要的癌基因,在多種腫瘤中過表達。AEG-1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用,參與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、血管再生、耐藥及預(yù)后。AEG-1基因可以通過endothelin-1(ET-1)/endothelinAreceptor(ETAR)信號通路上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶 2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的表達水平,從而促進骨肉瘤的細胞侵襲和對化療藥物的耐藥性。在骨肉瘤細胞系中敲除AEG-1基因可以顯著降低細胞的侵襲和遷移能力,并下調(diào)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化水平。rs16896059(-797G/A)位點位于AEG-1基因的啟動子區(qū),rs1311(c.*1463TC)位點位于第12外顯子后的3'非編碼區(qū)。這兩個SNP位點可能參與AEG-1基因轉(zhuǎn)錄、剪切和拼接表達的調(diào)控,從而參與骨肉瘤的發(fā)生和發(fā)展。目前,關(guān)于這兩個SNP位點與骨肉瘤易感性之間的關(guān)系還沒有研究。AEG-1基因多態(tài)性在骨肉瘤發(fā)生和發(fā)展中的意義還不清楚。第一部分骨肉瘤臨床特征分析目的:通過回顧性分析2013年1月至2015年12月之間,在包頭醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診和治療的35例骨肉瘤患者的人口學(xué)特征和腫瘤的發(fā)病特征,了解該疾病發(fā)生和發(fā)展的特點、為疾病的臨床診斷和治療,以及相關(guān)的研究提供基礎(chǔ)信息。方法:通過病歷查閱、調(diào)查問卷、電話隨訪等方法,回顧性分析2013年1月至2015年12月之間,在包頭醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診和治療的骨肉瘤患者的人口學(xué)特征和腫瘤的發(fā)病特征,包括性別、年齡、民族、藥物史、病史、是否吸煙、飲酒,外傷史、腫瘤發(fā)生位置、Ennecking分期、有無轉(zhuǎn)移、病理學(xué)分類等信息。結(jié)果:包頭醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院在2013年1月至2015年12月之間收治的符合本研究篩選標準的骨肉瘤患者共35例,平均年齡為24.1±10.5歲,10-20歲患者有27例,占77.14%;男性23例,女性12例(男女比例1.92:1),有外傷史的患者22例,占62.8%,吸煙者2例占5.71%,飲酒者3例占8.57%;發(fā)生于股骨的骨肉瘤有19例(54.29%),發(fā)生于脛骨的骨肉瘤有6例(占17.14%),發(fā)生在肱骨的患者有4例(占11.43%),發(fā)生在其他部位(包括橈骨、肩胛骨、脊柱、尺骨)的患者有6例(占17.14%);根據(jù)Ennecking分期,ⅡA期腫瘤的病例占17.14%(6/35),ⅡB期或Ⅲ期腫瘤的病例占82.86%(29/35)例。診斷時發(fā)生明確遠處轉(zhuǎn)移的有6例(占17.14%);骨母細胞型骨肉瘤患者共13例(占37.14%),軟骨母細胞型骨肉瘤患者有8例(占22.86%),纖維母細胞型患者有3例(8.57%),其他類型患者有4例(占11.43%),混合型骨肉瘤患者有7例(占20%)。結(jié)論:本研究報告了我院收治35例骨肉瘤患者的臨床特征,提供了本地區(qū)骨肉瘤患者的人口學(xué)特點、腫瘤發(fā)病特點相關(guān)的重要數(shù)據(jù)。第二部分AEG-1基因多態(tài)性與骨肉瘤發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性分析目的:骨肉瘤是最常見的骨原發(fā)性惡性腫瘤,好發(fā)于青少年,惡性程度極高,早期即可發(fā)生轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差。星形細胞上調(diào)基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1),是新近發(fā)現(xiàn)的原癌基因,與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展、骨肉瘤化療抗性以及患者病程進展與預(yù)后密切相關(guān),其具有良好的臨床應(yīng)用前景。本次主要回顧性研究分析AEG-1基因rs 16896059和rs 1311單核苷酸多態(tài)性與骨肉瘤發(fā)病風(fēng)險及臨床病理特征之間的關(guān)系。方法:本研究納入35例骨肉瘤患者和38例健康人或外傷患者。AEG-1基因rs 16896059和rs 1311單核苷酸多態(tài)性的基因型和等位基因通過PCR和直接測序進行檢測�；蛐秃偷任换虻念l率在病例組和對照組之間的差異通過卡方檢驗進行分析。AEG-1基因多態(tài)性與骨肉瘤發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性及與骨肉瘤患者的臨床病理特點之間的關(guān)系由ORs(odds ratios)和相應(yīng)的95%CIs(95%confidence intervals)進行表示。結(jié)果:AEG-1基因rs16896059多態(tài)性GG、GA和AA基因型在骨肉瘤病人中的頻率分別為62.8%、34.3%和2.9%;在健康對照組中的頻率分別為57.1%、37.1%和5.7%。AEG-1基因rs16896059多態(tài)性的AA基因型在對照組中的頻率顯著高于病例組中的頻率(P=0.022),結(jié)果表明AA基因與骨肉瘤發(fā)病風(fēng)險的降低有顯著的統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性(OR=0.375,95°%CI=0.043-0.891)。AEG-1 基因 rs16896059多態(tài)性G和A等位基因在病例組中的頻率為80.0%和20.0%,在對照組中的頻率為72.4%和27.6%。與G等位基因相比,A等位基因在對照組中的頻率顯著高于病例組,A等位基因可能與降低的骨肉瘤發(fā)病風(fēng)險有顯著相關(guān)性(P=0.038,OR=0.551,95%CI=0.387-0.972)。AEG-1 基因 rs 1311 多態(tài)性 TT、CT 和 CC 基因型在病例組中的頻率分別為543%、34.3%和11.4%;在對照組中的頻率分別為55.2%、39.5%和5.3%。rs 1311多態(tài)性T和C等位基因在病例組中的頻率為71.4%和28.6%;在對照組中的頻率為75.0%和25.0%。然而,rs 1311多態(tài)性的基因型和等位基因與骨肉瘤發(fā)生無顯著相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:AEG-1基因rs16896059多態(tài)性AA基因型和A等位基因可能是骨肉瘤發(fā)生的保護因子。這有待進一步大規(guī)模的研究證實我們的研究發(fā)現(xiàn)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R738.1
【部分圖文】：

山東大學(xué)博士學(xué)位論文研宄共納入３５例骨肉瘤患者和３８例對照者，所有參與者的基本特征圖２。對照組（年齡范圍為１３－４２歲）中有男性２５人，女性１３人，１．９２：１，平均年齡為２３．９士１１．２，其中小于２０歲的２８人。骨肉瘤組患為１１－４０歲，２３名男性和１２名女性，男女比例為１．９７：１，平均年０．５，其中年齡小于２０歲的有２８人。如表１所示，病例組和對照組之年齡分布均無顯著性差異（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑

逑３．２生活習(xí)慣及外傷史逡逑如圖３所示，對照組中有外傷史２４例，吸煙者有３例，飲酒者２例；骨肉逡逑瘤患者中有外傷史的２２例，吸煙者２例，飲酒者３例。然而，外傷史、吸煙、逡逑飲酒人群的分布在病例組和對照組間的頻率均沒有統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＞0．0５），見表逡逑２。逡逑□無口有逡逑＾＾ＺＺＺＺＺＺＩＺＩ邋１１＾邐Ｉ逡逑＾邐對照組邋邐９４．７％邐５．２（３％逡逑Ｅ邐■＇邋；；；逡逑釤骨肉瘤組邐９１．４％邐８．５７％逡逑邐邋邐ＺＺＺＺＺＩ邐Ｉ逡逑識邐對照組邐９２．１％邐７．８９％逡逑Ｓ邐，．：逡逑戜骨肉瘤組邐９４．３％＇邐５．７１％逡逑；邐逡逑識邋對照組邐３６．８％邋——｜邋“邐：．＇邋■邐：６＿｜｜｜邋ｌｌｌｌｌｉ逡逑毋邐逡逑玄骨肉瘤組邐３７．ｉ％—邐ｒ＿．邋ｉｎ．邋：６２．８Ｍｊｎａｎｉｉｉ逡逑邐；邐｜邐｜邐｜邐逡逑０．０％邐２０．０％邐４０．０％邐６０．０％邐８０．０％邐１００．０％逡

山東大學(xué)博士學(xué)位論文３（８．５７）邐２（５．２６）逡逑％邐３２（９１．４３）邐３６（９４．７４）的臨床特征逡逑位置逡逑研宄發(fā)現(xiàn)，在３５例骨肉瘤患者中發(fā)生于股骨的患者有１９例，例，發(fā)生在肱骨的有４例，發(fā)生在其他部位（包括橈骨、肩胛的患者共６例。骨肉瘤不同發(fā)病部位所占的比例，如圖４所其他逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2828681