發(fā)布時間：2020-09-18 07:37

　　 目的:創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury,TBI)是一種嚴重威脅人類健康的常見疾病。所有類型的創(chuàng)傷中死亡率和殘疾率最高。是目前青壯年人群致殘、致死的首要原因。歐美國家發(fā)病率高達150-200/10萬人/年,我國達100-150/10萬人/年。TBI后胃腸功能障礙主要臨床表現(xiàn)有:一是胃腸黏膜缺血,這通常導(dǎo)致應(yīng)激性潰瘍和消化道出血;二是腸道屏障破壞,導(dǎo)致細菌和內(nèi)毒素易位,導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和敗血癥的發(fā)生;三是運動功能障礙,這表現(xiàn)為腹脹,腹瀉,胃潴留,甚至毒性腸麻痹;四是導(dǎo)致胃腸黏膜對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收障礙,導(dǎo)致機體營養(yǎng)不良。對于前兩方面TBI后胃腸黏膜損傷和腸道屏障破壞所致內(nèi)毒素易位方面研究較多,但對于TBI后胃腸動力學(xué)研究少有報道。原因在于缺乏足夠重視和對于胃腸動力學(xué)評價缺乏規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)。大量研究表明TBI后患者營養(yǎng)狀況與預(yù)后呈正相關(guān)。TBI患者不僅急性期腦組織和全身皆處于高代謝狀態(tài),而且康復(fù)期仍處于蛋白質(zhì)高分解狀態(tài)。TBI患者的靜息能量消耗(resting metabolic expenditure,RME)顯著高于非TBI患者,重度TBI患者的RME值是非TBI重癥患者的240%,與燒傷體表面積達20%至40%的患者代謝狀態(tài)相似。急性期TBI患者呈現(xiàn)高能量代謝狀態(tài),隨著高分化代謝和免疫功能改變隨之出現(xiàn)蛋白質(zhì)過度分解,如無足夠營養(yǎng)攝取,以支持患者急性欺恢復(fù)和后期康復(fù)的需求,將直接影響預(yù)后。臨床上對于TBI患者的營養(yǎng)支持方式大都依靠腸內(nèi)營養(yǎng),而TBI后胃腸功能障礙將嚴重影響胃腸道對營養(yǎng)攝取,提高TBI后胃腸道功能障礙治療水平以提高TBI的治愈率具有重要的臨床意義。但目前對于TBI后胃腸動力學(xué)改變及其機制仍知之甚少。Ghrelin是參與胃腸運動調(diào)節(jié)的腦腸肽之一,具有多種作用。Ghrelin是否具有對TBI后胃腸道功能障礙有改善作用?機制如何?可否作為TBI后胃腸道功能障礙治療手段之一,因此,本課題設(shè)計如下:(1)建立TBI后胃腸功能障礙動物模型,觀察TBI后胃腸道改變;(2)觀察給予Ghrelin干預(yù)后TBI后胃腸功能障礙的改變;(3)探討Ghrelin對TBI后胃腸道功能障礙作用機制。方法:(1)選取成年健康雄性SD大鼠,建立大鼠TBI模型,大體觀察、病理和胃腸動力檢測,評估模型制作成功與否;(2)按照隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組(Sham)、創(chuàng)傷組(TBI)、Ghrelin組(Ghrelin),Ghrelin組于傷后30min經(jīng)大鼠尾靜注入Ghrelin 20ug/kg,分別進行大鼠胃動力檢測:胃內(nèi)壓檢測、胃排空率、小腸推進率、糞便含水量百分比檢測和胃內(nèi)容物占體重的百分比檢測,切取胃、距回盲部15 cm處小腸、回盲部(近端回腸腸管長約3 cm,遠端3 cm結(jié)腸腸管長約3 cm),光鏡和電鏡下觀察胃腸黏膜微觀變化;(2)取假手術(shù)組(Sham)、創(chuàng)傷組(TBI)和Ghrelin組(Ghrelin)72 h腦皮質(zhì)腦組織采用多通道蛋白芯片篩查蛋白表達水平,尋找差異蛋白。結(jié)果:成功建立大鼠TBI后胃腸功能障礙模型,并通過組織病理學(xué)和功能學(xué)進行驗證。實驗證明胃腸道功能障礙存在于大鼠TBI后。(1)依據(jù)神經(jīng)功能缺陷綜合評分量表測定各組神經(jīng)功能改變,結(jié)果顯示:TBI組和Ghrelin組6h神經(jīng)功能缺損綜合評分明顯高于Sham組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);而TBI組和Ghrelin組6h神經(jīng)功能缺損綜合評分無差異(P0.05)。TBI組和Ghrelin組24h、48h、72h神經(jīng)功能缺損綜合評分均明顯高于Sham組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);TBI組24h、48h、72h神經(jīng)功能缺損綜合評分也均明顯高于Ghrelin組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);(2)實驗大鼠胃腸觀察結(jié)果:Sham組大鼠可見腸壁呈粉紅色,TBI組胃擴張,壁變薄,色蒼白或暗紅,小腸腸腔擴張、色澤灰暗,甚至瘀血,腸壁伴有大量黏液,可見明顯的腸道脹氣,僅有少量排出,即使術(shù)前禁食24 h在各時間點仍有胃內(nèi)大量殘余食物。Ghrelin組6 h組胃內(nèi)殘余食物與TBI組無明顯區(qū)別但24 h后殘余量明顯減少。糞便含水量百分比結(jié)果顯示:Sham組24h、48h、72h糞便含水量均高于TBI組和Ghrelin組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);Ghrelin組24h、48h、72h糞便含水量也均高于TBI組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。大鼠胃內(nèi)容物占體重百分比比較結(jié)果顯示:TBI組24h、48h、72h胃內(nèi)容物占體重百分比均高于Sham組和Ghrelin組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);而Sham組和Ghrelin組24h、48h、72h胃內(nèi)容物占體重百分比無差異(P0.05)。(3)TBI后72h電鏡可見胃腺中的主細胞,細胞表面有散在的、短小的微絨毛。胞漿突出到腺腔,胞漿中可見大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),排列不甚規(guī)則,線粒體局部腫脹,內(nèi)可見髓樣小體。胞漿內(nèi)可見大量的內(nèi)分泌顆粒,線粒體散在分布,腫脹,線粒體嵴變短變少,其內(nèi)有髓樣小體,Ghrelin組72h胃黏膜電鏡下改變較TBI組明顯好轉(zhuǎn)。(4)多通道蛋白芯片結(jié)果:于72h取各組腦皮質(zhì)組織采用蛋白芯片檢測蛋白表達水平。與Sham比,TBI組有14個蛋白差異表達有統(tǒng)計學(xué)意義。Ghrelin干預(yù)后,其中b FGF蛋白表達水平明顯下降。結(jié)論:本研究證實TBI后存在胃腸道功能動力障礙;Ghrelin能有效改善TBI后胃腸道黏膜顯微結(jié)構(gòu)和胃腸動力;初步證實Ghrelin改善TBI后胃腸動力障礙機制在于腦保護作用。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R651.15
【部分圖文】：

鼠測量體重后，按每 100 克×0.3 ml 的 10%水合氯醛進行腹腔內(nèi)注暴露鼠腹腔注射麻醉成功后，將其固定在立體定向儀上，剃除頭部皮切開頭皮，剝離骨膜，于冠狀縫后 5 mm，矢狀縫右側(cè) 5 mm交會5 mm骨孔，硬膜完整。將eCCI設(shè)置打擊深度 3 mm、打擊最低點持s、打擊速率 5 m/s 打擊后用縫合頭皮。如有出血使用明膠海綿進模型制備完全后，等待大鼠出現(xiàn)夾尾反射后，將其固定至電子皮質(zhì)損傷撞擊儀深度 3 mm、打擊最低點持續(xù)時間 200 ms、打擊速率 5 m/s。以鉆行打擊，待無活動性出血后用生理鹽水沖洗，碘伏消毒，逐層縫1）。

TBI 后取材（A:大鼠腦組織右側(cè)紅色區(qū)損傷區(qū)域；B：腸組織；C：sham 胃組織；BI 后胃組織）.2 HE 染色.2.1 實驗器材及試劑名稱 廠家 型號脫水機 佛山市亞諾精密儀器有限公司 CH150包埋機 湖北泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司 TKYTSI病理切片機 上海泰維科技有限公司 TL-820凍臺 常州醫(yī)療電子有限公司 KY0405組織攤片機 湖南迪亞儀器設(shè)備有限公司 KJP408烤箱 上海泰維科技有限公司 DHG-9140A玻片及蓋玻片 武漢長生實驗器材有限公司 34232C置光學(xué)顯微鏡 上海儀圓光學(xué)廠 CX31

Sham 8 1.54±0.03 1.37±0.04 1.92±0.05 1.70±0.05TBI 8 34.89±1.57 20.50±1.84 16.53±1.21 14.46±1.30t 60.071 29.399 34.122 27.742P 0.000 0.000 0.000 0.000傷性顱腦損傷腦組織觀察組織觀察結(jié)果：Sham組各時相點神經(jīng)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。TBI 組傷后 4A），大鼠腦皮質(zhì)可見散在變性壞死的神經(jīng)元，可見大鼠皮質(zhì)中的神散在的變性和壞死。神經(jīng)元細胞體呈三角形收縮，細胞質(zhì)著色減少，色加深；在損傷后24小時在大腦皮層中觀察到較為廣泛神經(jīng)元變性壞細胞出現(xiàn)核溶解和空泡化，神經(jīng)元存活數(shù)量明顯減少，細胞間隙增寬有大量水腫（圖 4B）；傷后 72h 仍可觀察到廣泛水腫和神經(jīng)元變性（圖 4D）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 邱曉偉;程世翔;涂悅;張賽;;應(yīng)用腦皮質(zhì)撞擊儀建立顱腦創(chuàng)傷后應(yīng)激性潰瘍動物模型的研究[J];中國醫(yī)藥;2014年05期

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本文編號：2821383