目的:乳腺癌已經(jīng)成為目前女性最高發(fā)的惡性腫瘤之一,并顯示出了年輕化[1]。經(jīng)手術放化療后,腫瘤仍出現(xiàn)轉(zhuǎn)移,多是由于腫瘤干細胞顯示出的多藥耐藥性引起。耐藥的腫瘤細胞中NF-κB的表達異�？赡芴崾灸退幮耘cNF-κB(nuclear factorκB,細胞核因子κB)之間可能存在某些聯(lián)系[2]。NF-κB的下游基因中很可能有P-gp,當NF-κB被激活,P-gp蛋白表達增高從而引起癌細胞的耐藥[3]。DATS(diallyl trisulfide,二烯丙基三硫化物,又稱大蒜素),作用靶點多且高效低毒,在逆轉(zhuǎn)耐藥方面有良好前景[4]。本課題研究的為DATS逆轉(zhuǎn)乳腺癌腫瘤干細胞耐藥的作用,以及是否因抑制NF-κB的異常激活,從而對P-gp的表達產(chǎn)生抑制,由此逆轉(zhuǎn)乳腺癌腫瘤干細胞的耐藥。方法采用貼壁培養(yǎng)及球囊培養(yǎng),加之流式細胞術檢測MCF-7細胞株及MCF-7/ADM阿霉素耐藥的細胞株中乳腺癌干細胞含量的比例;再使用球囊培養(yǎng)的方法富集MCF-7/ADM耐藥株中乳腺癌干細胞;采用Annexin V聯(lián)合7-AAD雙染法檢測DATS對MCF-7/ADM球囊細胞(乳腺癌干細胞)及貼壁細胞(乳腺癌細胞)毒性,以及使用DATS逆轉(zhuǎn)耐藥前后的ADM(阿霉素)對細胞毒性作用;Western Blotting檢測DATS對P-gp以及EMSA方法檢測NF-κB表達的調(diào)節(jié),所有的數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成分析。結(jié)果:(1)MCF-7細胞以及MCF-7/ADM細胞的球囊生成率分別為1.13±0.55%和10.16±0.54%,流式細胞儀檢測兩種細胞株中CD44+CD24-細胞的比例分別為2.83±1.38%和63.94±2.31%。耐藥株中的癌干細胞比例更高,兩者差別有統(tǒng)計學意義。(以上P0.05,n=3)(2)DATS濃度為10、20μmol/L時MCF-7/ADM貼壁細胞與球囊細胞凋亡率無統(tǒng)計學差異(P0.05),當DATS濃度為40、60、80μmol/L時,MCF-7/ADM球囊細胞凋亡率低于貼壁細胞,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05,n=3)。當DATS濃度為60μmol/L作用24h后,細胞凋亡率明顯增高。(3)在DATS濃度為10μmol/L作用下使用化療藥物5μmol/L ADM作用24h后,MCF-7/ADM的貼壁細胞與球囊細胞的凋亡率(41.07±0.29%、10.30±0.79%)明顯高于單獨使用化療藥物ADM細胞組(25.46±0.58%、5.42±0.31%),且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05,n=3)。經(jīng)過撤藥24h后,單純化療藥物細胞組凋亡率下降,而聯(lián)合DATS細胞組凋亡率有上升趨勢,差別有統(tǒng)計學意義。并且球囊細胞加入DATS后化療的敏感性相對上升。(4)MCF-7/ADM的球囊細胞較貼壁細胞有明顯的P-gp及NF-κB表達;DATS作用于兩種細胞后P-gp與NF-κB均被抑制,差異有意義(P0.05,n=3);在DATS作用下,使用化療藥物ADM 24h后,兩組細胞的P-gp及NF-κB表達明顯抑制更加顯著,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05,n=3)。(5)Western Blotting檢測不同濃度的PDTC(NF-κB抑制劑)處理兩種細胞24h后,10μmol/L DATS與不同濃度PDTC作用,兩組細胞株P-gp表達抑制且呈濃度依賴,差別有統(tǒng)計學意義。40μmol/L PDTC聯(lián)合DATS比0μmol/L PDTC聯(lián)合DATS處理24h后對P-gp的表達有明顯的抑制作用(P0.05);40μmol/L的PDTC與DATS一同處理兩組細胞株0h、12h、24、48h后,P-gp有明顯抑制且呈時間依賴,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:(1)耐藥的乳腺癌細胞株可以富集出含量更高的腫瘤干細胞。(2)DATS可以逆轉(zhuǎn)乳腺癌腫瘤干細胞對阿霉素的耐藥作用。(3)P-gp和NF-κB的高表達與乳腺癌干細胞的耐藥有關。(4)DATS干預NF-κB,能夠部分抑制P-gp的高表達,逆轉(zhuǎn)乳癌干細胞化療耐藥。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

MCF-7/ADM球囊形成增高明顯，而且耐藥株每個球囊的細胞數(shù)明顯多于MCF-7細胞株。第十日，MCF-7細胞株球囊為1.13±0.55%，MCF-7/ADM耐藥細胞株球囊為10.16±0.54％，兩者差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001，n=3)。(見圖2-1、表2-1)MCF-7細胞株 MCF7/ADM細胞株圖2-1 十日后，MCF-7細胞株培養(yǎng)球囊細胞形成與MCF-7/ADM細胞株球囊細胞形成表2-1 秩和檢驗兩組細胞株第十日球囊形成率（%）細胞株 球囊形成率（%）MCF-7 1.13±0.55MCF-7/ADM 10.16±0.54t 值 20.258P 值 <0.0012.1.2 MCF-7 及 MCF-7/ADM 中 CD44+CD24-細胞所占比例用流式細胞術進一步檢測 MCF-7與 MCF-7/ADM的球囊細胞 CD44+CD24-細胞所占比例，經(jīng)檢驗發(fā)現(xiàn)前者球囊細胞中 CD44+CD24-細胞的比例明顯低于后者。CD44-FITC 發(fā)射綠色熒光，CD24-PE 分發(fā)射橙紅色熒光。CD44+CD24-細胞位于散點圖的左上方綠色熒光強紅色熒光弱的區(qū)域內(nèi)。流式細胞儀檢測兩個細胞株中CD44+CD24-細胞的比例分別為 2.83±1.38％和 63.93±2.31％。差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001，n=3)(見圖 2-2、表 2-2)。

MCF-7 細胞株 MCF-7/ADM 細胞株圖 2-2 MCF-7 球囊細胞和 MCF-7/ADM球囊細胞中CD44+CD24-細胞比表 2-2 t檢驗 MCF-7 的球囊細胞與 MCF-7/ADM 的球囊細胞中 CD44+CD24-細細胞株 CD44+CD24-細胞比例

圖 2-3 不同濃度 DATS對 MCF-7/ADM 貼壁細胞和球囊細胞的 2-3 χ2檢驗不同濃度DATS 下MCF-7/ADM貼壁細胞與球囊L 10μmol/L 20μmol/L 40μmol/L 60μmol/L 32 8.04±0.32 10.25±0.14 14.83±0.24a19.60±0.31abc50 5.32±0.50 6.60±0.35 8.26±0.23d12.62±0.12abcdl/L比較，aP <0.05; 與同組 20μmol/L 比較，bP<0.05; 與同組 40μmol/L 比較較，dP<0.05

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 韓娜娜;孫長崗;莊靜;楊靜;;MCF-7/PTX多藥耐藥細胞株中CD_(44)~+CD_(24)~-乳腺癌干細胞富集的研究[J];山東醫(yī)藥;2013年06期

2 馬鳳英,王文英;大蒜素的藥理學研究進展[J];中草藥;1997年11期

本文編號：2818257