新型量子點(diǎn)周圍神經(jīng)示蹤劑的研究

發(fā)布時(shí)間：2020-09-12 14:45

　　目的:周圍神經(jīng)損傷一直以來都是手足顯微外科領(lǐng)域治療的常見病和疑難病。早期準(zhǔn)確診斷和及時(shí)評(píng)估修復(fù)效果是提升周圍神經(jīng)損傷臨床治療水平的關(guān)鍵,目前納米熒光粒子是早期神經(jīng)示蹤的理想材料,但是常用的熒光粒子發(fā)射光顏色單一且波長接近紫外光區(qū),此波長區(qū)間生物組織自發(fā)熒光較強(qiáng),觀察時(shí)的對(duì)比效果不夠明顯。量子點(diǎn)具有量子尺寸效應(yīng),可以通過改變其尺寸大小從而調(diào)節(jié)其發(fā)射光譜,發(fā)出不同顏色的熒光,且表面修飾后可以通過不同連接反應(yīng)與功能蛋白質(zhì)結(jié)合。所以將其作為熒光標(biāo)記物,利用與神經(jīng)元特異性結(jié)合的霍亂毒素B亞基作為配體解決神經(jīng)特異性,通過EDC反應(yīng)合成新型的神經(jīng)示蹤劑。方法:室溫下將一定濃度的CTB和QD按比例混合,加入EDC促進(jìn)反應(yīng),過濾后放入離心超濾管離心提純,最終合成CTB-QD。分別測(cè)量CTB,QD,CTB-QD的熒光光譜,吸收光譜,Zeta電勢(shì),透射電鏡觀察CTB-QD。將CTB-QD加入準(zhǔn)備好的PC12細(xì)胞,分別培養(yǎng)1、2、4、8個(gè)小時(shí)后用共聚焦顯微鏡觀察,并加入DAPI核熒光染料進(jìn)行雙染。在成年大鼠的坐骨神經(jīng)近端注射一定量的CTB-QD,術(shù)后1周將大鼠處死后灌洗,4%多聚甲醛固定,將注射點(diǎn)節(jié)段的坐骨神經(jīng)、L4背根神經(jīng)節(jié)、L4節(jié)段脊髓取材,冰凍切片后直接用共聚焦顯微鏡觀察。結(jié)果:CTB與CTB-QD的PL光譜和吸收光譜明顯不一樣,QD與CTB-QD二者發(fā)射光峰位之間存在細(xì)小的差別,離心液PL光譜顯示未有CTB-QD滲漏,離心分離得比較完全。CTB電勢(shì)均值為+7.1m V,CTB-QD電勢(shì)均值為-37.8m V,CTB與CTB-QD的Zeta電勢(shì)有明顯的改變。電鏡下CTB-QD最大粒徑為9.07nm,最小粒徑5.74nm,平均粒徑7.16nm,大多數(shù)樣本大小分布于7-7.5nm之間,占總數(shù)的27%,與QD的直徑差別不大。CTB-QD在1小時(shí)即少量進(jìn)入PC細(xì)胞內(nèi),2小時(shí)細(xì)胞中CTB-QD部分分布,4小時(shí)后進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的量趨近飽和,亮度逐漸穩(wěn)定、清晰,8小時(shí)與4小時(shí)細(xì)胞成像圖沒有明顯區(qū)別。CTB-QD特異性結(jié)合于細(xì)胞膜,未進(jìn)入細(xì)胞核。大鼠術(shù)后1周仍可在坐骨神經(jīng)注射點(diǎn)處顯示CTB-QD,在L4節(jié)段背根神經(jīng)節(jié)處、L4節(jié)段脊髓前角處均可顯示CTB-QD。結(jié)論:CTB與CTB-QD的光譜改變、電勢(shì)改變說明了CTB與QD結(jié)合成功,CTB-QD仍具有良好的熒光性質(zhì),參與神經(jīng)軸突內(nèi)的軸漿運(yùn)輸。結(jié)合物能夠與神經(jīng)元胞體上的GM1結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合,4小時(shí)后可進(jìn)行清晰的細(xì)胞成像。術(shù)后1周可在注射點(diǎn)節(jié)段坐骨神經(jīng)、相應(yīng)節(jié)段背根神經(jīng)節(jié)、脊髓前角處發(fā)現(xiàn)結(jié)合物,與解剖通路一致。由此證明CTB-QD可用于周圍神經(jīng)逆行神經(jīng)示蹤,且合成方便,觀察方法簡便、直觀,對(duì)于觀測(cè)周圍神經(jīng)修復(fù)效果與判斷預(yù)后有重要意義,也為提高臨床上周圍神經(jīng)損傷的總體診療效果奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R688
【部分圖文】：

光譜圖,PL光譜,離心液,光譜圖