背景類器官培養(yǎng)是一種新發(fā)展的體外三維培養(yǎng)技術(shù),2014年Lancaster在《Science》上發(fā)表綜述,將“類器官(Organoid)”明確定義為:以干細胞或器官祖細胞為原料,經(jīng)過體外培養(yǎng),能發(fā)生細胞分化及譜系定向,即自組裝為器官樣結(jié)構(gòu)的細胞群。相比于傳統(tǒng)的細胞系和PDX模型,它具有擬合度高、培養(yǎng)周期短、傳代穩(wěn)定等優(yōu)勢,近年來被廣泛應(yīng)用于腫瘤研究,目前全球各個實驗室已陸續(xù)培養(yǎng)出具有肝、胰腺、肺、腎、視網(wǎng)膜等微觀結(jié)構(gòu)的類器官組織。2018年HansClevers實驗室率先在《Cell》雜志上發(fā)表文章,宣布成功建立了乳腺癌類器官的實驗方法,并構(gòu)建了一個含100例乳腺癌類器官的生物庫。乳腺癌類器官研究尚在起步階段,而國內(nèi)尚缺乏乳腺癌類器官相關(guān)研究。目的1.探索構(gòu)建乳腺癌體外類器官培養(yǎng)的實驗方法;2.對成功建立的類器官模型進行組織層面、基因?qū)用娴脑u估;3.利用類器官模型進行個性化藥物敏感性檢測,對比臨床療效,評價其應(yīng)用于臨床的可行性。方法1.納入2017.11至2018.4就診于中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院乳腺門診的乳腺癌患者,超聲引導下穿刺活檢取樣,在以基質(zhì)膠為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基中對樣品進行體外類器官培養(yǎng),用倒置顯微鏡觀察類器官生長情況;2.將培養(yǎng)成功的類器官制成石蠟標本,切片并進行HE染色及免疫組化染色,進行組織學評估。3.用試劑盒提取類器官DNA,構(gòu)建DNA文庫,進行二代測序并提取拷貝數(shù)變異(CNVs)及單核苷酸變異(SNVs)數(shù)據(jù),利用生物信息學軟件進行疾病預測及分析;4.分別用不同濃度的藥物處理類器官,測定細胞活性,評價藥物敏感性,并與臨床療效進行對比分析。結(jié)果1.本實驗共納入15例活檢樣本,類器官培養(yǎng)成功3例。2.將培養(yǎng)成功的類器官制成石蠟切片,HE染色提示細胞核質(zhì)比、核異型性符合腫瘤細胞特征。IHC染色結(jié)果與原腫瘤部分符合。3.培養(yǎng)成功的類器官CNV及SNV測序發(fā)現(xiàn)變異基因參與細胞生長、細胞增殖、抑制細胞凋亡、促進腫瘤血管生長等環(huán)節(jié)。4.對3例類器官進行藥物敏感性篩查,發(fā)現(xiàn)了可能有效的治療方案,和實際臨床治療療效有一定聯(lián)系,但證據(jù)不充分。結(jié)論在本實驗中,我們初步建立了乳腺癌患者的體外類器官培養(yǎng)平臺,但成功率低于國外文獻報道,類器官組織及遺傳層面檢測符合腫瘤細胞特征,但缺乏與原腫瘤對照,后續(xù)實驗需更完善、更大規(guī)模的樣本檢測。類器官藥物敏感性檢測結(jié)果和實際臨床治療療效有一定的一致性,但對于臨床應(yīng)用的指導仍需更多研究數(shù)據(jù)支持。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

殖、分化的了解，人們逐漸成功地在體外培養(yǎng)出正常組織。２０１４年Ｌａｎｃａｓｔｅｒ＾回顧逡逑了既往研宄，明確定義了類器官為：以干細胞或器官祖細胞為原料，經(jīng)過體外培養(yǎng)，逡逑能發(fā)生細胞分化及譜系定向，即自組裝為器官樣結(jié)構(gòu)的細胞群（如下圖１所示）。逡逑＾邋Ｍｍ邐做肝嫌或祖細胞逡逑細胞分選逡逑ｆ？邐譜系定向逡逑栜％栛逡逑圖１類器官形成過程示意圖逡逑２００９年Ｈａｎｓ邋Ｃｌｅｖｅｒｓ實驗室首先發(fā)現(xiàn)了一種Ｌｇｒ５＋的細胞具有腸腔干細胞功能逡逑［１１］，隨后基于這種腸腔干細胞建立起一種新的體外培養(yǎng)方式［１２］，即小腸類器官培養(yǎng)，逡逑通過在基質(zhì)膠中加入特殊的生長因子，模擬體內(nèi)環(huán)境，最終形成具有腸上皮各種類逡逑型細胞及腸腔形態(tài)的類器官，既保留了腸上皮細胞原始分化的能力，又能對其進行逡逑８逡逑

圖.怕口.--------叫卜吻‘

圖３實驗設(shè)計示意圖逡逑

【參考文獻】

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1 徐兵河;江澤飛;胡夕春;;中國晚期乳腺癌臨床診療專家共識2016[J];中華醫(yī)學雜志;2016年22期

2 黎籽秀;劉博;徐凌麗;楊琳;王慧君;周文浩;;高通量測序數(shù)據(jù)分析和臨床診斷流程的解讀[J];中國循證兒科雜志;2015年01期

3 郭汝金;敖麗娟;李詠梅;陳茉弦;;神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1-ErbB信號通路的研究進展[J];中國康復醫(yī)學雜志;2014年07期

4 王蓓;楊磊;笪冀平;;胸腹腔積液離心石蠟包埋在病理診斷中的價值[J];臨床與實驗病理學雜志;2011年11期

5 杜仁騫;金力;張鋒;;基因組拷貝數(shù)變異及其突變機理與人類疾病[J];遺傳;2011年08期

6 唐振寧;張帆;姜軍;;乳腺癌發(fā)生演進中RANKL/RANK通路作用的研究進展[J];中華腫瘤防治雜志;2011年08期

7 陳穎欣;李連宏;楊曉麗;王波;王麗霞;;CK5、CK8和BCRP在人乳腺病變組織中的表達及其意義[J];腫瘤;2010年06期

本文編號：2815329