目的:研究丹參酮ⅡA對(duì)大鼠背部穿支皮瓣的成活以及對(duì)chokeⅡ區(qū)血管的影響,并研究可能的作用機(jī)制,為提高臨床穿支皮瓣成活率提供理論依據(jù)。方法:1.實(shí)驗(yàn)分組及動(dòng)物模型:將84只健康成年雄性SD大鼠,體重200-250g,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組各42只。在大鼠背部的左側(cè)建立以旋髂深動(dòng)脈為蒂的跨區(qū)穿支皮瓣模型,包括旋髂深動(dòng)脈、肋間動(dòng)脈、胸背動(dòng)脈三個(gè)穿支血管體及它們之間的兩個(gè)choke區(qū)域。以大鼠的肩胛下角為皮瓣的上界,髂后上嵴的連線為皮瓣的下界,以后正中線為皮瓣的內(nèi)側(cè)緣,切取的皮瓣面積大小為9.5cmx2.5cm。實(shí)驗(yàn)組于皮瓣術(shù)后2h開(kāi)始腹腔注射丹參酮ⅡA注射液3.2ml/kg,連續(xù)給藥7天。對(duì)照組在相同的時(shí)間點(diǎn)予以相同劑量的生理鹽水進(jìn)行腹腔注射給藥。2.檢測(cè)指標(biāo)2.1大體觀察及皮瓣成活率:術(shù)后連續(xù)7天觀察皮瓣的成活情況,包括皮瓣的顏色、質(zhì)地、腫脹、血運(yùn)以及毛發(fā)生長(zhǎng)情況等。在術(shù)后第7天,大鼠麻醉狀態(tài)下,拍攝背部皮瓣高清照片,導(dǎo)入Image Pro Plus6.0軟件計(jì)算皮瓣的成活面積百分比。2.2血管造影:在術(shù)后第7天,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取6只大鼠,在大鼠麻醉狀態(tài)下,頸動(dòng)脈穿刺,灌入明膠-氧化鉛混合物,拍攝X線片,觀察皮瓣血管情況。2.3皮瓣chokeⅡ區(qū)HE染色:在術(shù)后第7天,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取6只大鼠,取大鼠皮瓣旋髂深動(dòng)脈和肋間動(dòng)脈穿支之間的chokeⅡ區(qū)組織,進(jìn)行HE染色,觀測(cè)微血管密度。2.4皮瓣chokeⅡ區(qū)血流量檢測(cè):實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取6只大鼠,在術(shù)后第1、3、7天,大鼠麻醉狀態(tài)下,用激光多普勒檢測(cè)皮瓣chokeⅡ區(qū)血流量。2.5 RT-PCR檢測(cè)皮瓣chokeⅡ區(qū)VEGF、HIF-1α、eNOS、SOD-1、Caspase3、Bcl-2、Bax的表達(dá)情況:在術(shù)后第1、3、7天,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取6只大鼠,在大鼠麻醉狀態(tài)下,取皮瓣chokeⅡ區(qū)組織,采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)VEGF、HIF-1α、eNOS、SOD-1、Caspase3、Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。2.6統(tǒng)計(jì)分析:采用spss 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)據(jù)均成正態(tài)分布,用X±S表示,組間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。采用GraphPad.Prism 7.0制圖。結(jié)果:1.皮瓣大體觀察及成活率:術(shù)后大鼠全部成活,未出現(xiàn)感染情況。術(shù)后1天,兩組大鼠皮瓣遠(yuǎn)端不同程度腫脹,暗紫色,沒(méi)有明顯壞死區(qū)域。術(shù)后第3天,兩組大鼠皮瓣遠(yuǎn)端呈現(xiàn)棕褐色,出現(xiàn)部分壞死區(qū)域,不明顯。術(shù)后第7天,兩組大鼠皮瓣遠(yuǎn)端壞死區(qū)域界線明顯,壞死區(qū)域呈干燥、結(jié)痂狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)組皮瓣成活率為(85.53±5.68)%,對(duì)照組為(78.62±5.36)%,實(shí)驗(yàn)組皮瓣成活率顯著高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.血管造影:術(shù)后7天皮瓣明膠氧化鉛造影顯示實(shí)驗(yàn)組新生血管多,chokeⅡ區(qū)血管結(jié)構(gòu)清晰,而對(duì)照組chokeⅡ區(qū)血管結(jié)構(gòu)紊亂,新生血管較少。3.皮瓣HE染色:術(shù)后7天,實(shí)驗(yàn)組chokeⅡ區(qū)的微血管密度(MVD)為(27.90±2.86)個(gè)/mm~2高于對(duì)照組的(19.77±3.17)個(gè)/mm~2,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.皮瓣血流量的檢測(cè):術(shù)后第1、3、7天,實(shí)驗(yàn)組chokeⅡ區(qū)血流量分別為(60.28±8.62)pu,(82.86±9.02)pu,(128.39±10.61)pu均高于相同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組chokeⅡ區(qū)的血流量(36.20±8.15)pu,(65.88±4.41)pu,(101.11±5.39)pu,所有p0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.q RT-PCR的結(jié)果:兩組術(shù)后1天VEGF、HIF-1α、eNOS、SOD-1、Caspase3、Bcl-2、Bax基因的表達(dá)情況沒(méi)有顯著性差異;術(shù)后第3、7天,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組的VEGF、HIF-1α、eNOS、SOD-1、Bcl-2基因表達(dá)明顯上調(diào),Caspase3、Bax基因表達(dá)明顯下調(diào),并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:丹參酮ⅡA可以增加大鼠皮瓣chokeⅡ區(qū)血流量及微血管密度,促進(jìn)跨區(qū)穿支皮瓣的成活面積。其作用機(jī)制可能是促進(jìn)血管新生,減輕缺血再灌注損傷,減少細(xì)胞凋亡,從而影響皮瓣成活。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R68
【部分圖文】：

丹參酮ⅡA 對(duì)大鼠背部穿支皮察 chokeI、II 區(qū)域并用記號(hào)筆在大鼠背部表皮做，用無(wú)菌 4-0 絲線原位間斷縫合(圖 1c)。術(shù)后創(chuàng)緣大鼠由同一位術(shù)者設(shè)計(jì)切取背部皮瓣，保證切取的同而增加影響皮瓣成活的因素。

觀察 chokeI、II 區(qū)域并用記號(hào)筆在大鼠背部表皮做好相應(yīng)的標(biāo)記(圖1b)。徹底止血后，用無(wú)菌 4-0 絲線原位間斷縫合(圖 1c)。術(shù)后創(chuàng)緣涂抹金霉素軟膏，預(yù)防感染。所有大鼠由同一位術(shù)者設(shè)計(jì)切取背部皮瓣，保證切取的皮瓣厚度一致，減少因皮瓣厚度不同而增加影響皮瓣成活的因素。圖 1a:皮瓣設(shè)計(jì)：將大鼠麻醉脫毛后固定，在背部左側(cè)以正中線為內(nèi)側(cè)緣，肩胛下角連線為上界，髂后上棘連線為下界，設(shè)計(jì)大小約 9.5cm×2.5cm 的矩形皮瓣。圖 1b:切取以旋髂深動(dòng)脈為蒂的跨區(qū)穿支皮瓣，包含胸背動(dòng)脈（TD）、肋間動(dòng)脈（IC）、旋髂深動(dòng)脈（DCI）和兩個(gè) choke 區(qū)域。圖 1c:皮瓣術(shù)后無(wú)菌 4-0 絲線原位間斷縫合，并在皮膚標(biāo)記三個(gè)血管體和兩個(gè) choke 區(qū)。

大鼠麻醉脫毛后固定，在背部左側(cè)以正中線為內(nèi)側(cè)緣，肩上棘連線為下界，設(shè)計(jì)大小約 9.5cm×2.5cm 的矩形皮動(dòng)脈為蒂的跨區(qū)穿支皮瓣，包含胸背動(dòng)脈（TD）、肋間動(dòng)脈（DCI）和兩個(gè) choke 區(qū)域。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2814004