目的:通過探討中藥丹紅注射液(Danhong injection,DH)聯(lián)合人脂肪干細胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs)對脂肪移植動物模型移植脂肪顆粒(adipose granu1e,AG)成活率的影響,尋找提高自體脂肪移植(Autologous fat transplantation,AFT)成活率的新方法。方法:1處理脂肪組織,分離并體外培養(yǎng)hADSCs;對培養(yǎng)得的第三代hADSCs運用流式細胞儀進行相關抗原檢測,通過研究其相關抗原表達情況確定細胞性質。2制作AG并據干預因素不同分成四組,A組為單純AG組、B組為AG+hADSCs組、C組為DH+AG組、D組為DH+hADSCs+AG組。實驗裸鼠隨機分組,每組6只,運用脂肪顆粒注射填充法構建脂肪移植裸鼠動物模型;后AB兩組每日腹腔注射生理鹽水,CD兩組每日注射等量DH。移植術后15 d、30 d每組分別處死3只裸鼠,測量移植物體積,顯微鏡下觀察移植物纖維增生情況和新生毛細血管數量、通過免疫組織化學切片法(Immunohistochemistry sections,IHC)檢測移植物血管的密度值。結果:1.hADSCs培養(yǎng)7-9 d后培養(yǎng)瓶中見到有大量梭形細胞,14 d左右見梭形細胞呈旋渦狀或束狀。原代細胞達到80%融合時進行傳代。用流式細胞術對第三代hADSCs進行相關抗原檢測:表明CD29、CD44、CD90的表達率均在92%以上;CD31、CD45、CD146陽性率均小于6%(Fig.5),是幾乎不表達的,證明該實驗中所培養(yǎng)的細胞確實是h ADSCs。2.移植術后15 d,可見移植物表面含少量毛細血管的包膜形成,四組對比:D組移植物新生毛細血管最多,A組最少,B、C兩組介于A、D之間。移植術后30 d,對移植物的體積比較:A與B,A與C,A與D,B與D,C與D之間的差異均具統(tǒng)計學意義(P0.05),B組與C組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),即D組最大,A組最小,B、C兩組介于A、D之間。3.對移植術后15 d移植物血管密度值進行兩兩比較,A與B,A與C,A與D,B與D,C與D之間的差異均具統(tǒng)計學意義(P0.05);B與C之間的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),認為D組最高,A組最低,B、C兩組組介于A、D組之間。結論:DH與h ADSCs雙因素聯(lián)合協(xié)同自體脂肪移植,優(yōu)于單因素干預,動物模型脂肪移植物成活率提高,且移植物周圍新生毛細血管的密度更大。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R622
【部分圖文】：

圖 1 原代 hADSCs 培養(yǎng) 24h 的形態(tài)(×100) The morphology of hADSCs cultured for 24 hours at passage (×100)

圖 2 原代 hADSCs 培養(yǎng) 7d 的形態(tài)(×100) The morphology of hADSCs cultured for 7 days at ppassage (×100)

圖 4 第 3 代 hADSCs 培養(yǎng) 48h 的形態(tài)(×100)morphology of hADSCs cultured for 5 days at 3rd pas

【參考文獻】

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本文編號：2813285