目的:明確miR-30d對人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及相關(guān)作用機制。方法:CCK-8實驗檢測miR-30d對人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞株增殖的影響;Transwell實驗檢測miR-30d對尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞的侵襲能力的影響;使用劃痕實驗檢測miR-30d對尤文肉瘤細(xì)胞SK-ES-1遷徙能力的影響;使用Hoechst33258染色在熒光顯微鏡下觀察mi R-30d過表達時人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞形態(tài)的變化;流式細(xì)胞技術(shù)檢測miR-30d對人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞株凋亡的影響;Western blot檢測miR-30d過表達時人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞中侵襲、遷徙相關(guān)蛋白MMP-2和MMP-9以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和PARP的表達情況。結(jié)果:CCK-8實驗結(jié)果顯示,miR-30d過表達可顯著抑制人尤文肉瘤細(xì)胞株SK-ES-1的增殖;Transwell實驗結(jié)果顯示miR-30d過表達可顯著抑制尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞的侵襲能力;劃痕實驗檢測發(fā)現(xiàn)miR-30d顯著抑制尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞的遷徙能力;Hoechst 33258染色于熒光倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)miR-30d過表達組(miR-30d模擬物組)中人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)了典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)變化,包括染色質(zhì)濃縮、核膜裂解、細(xì)胞核裂解等;流式細(xì)胞術(shù)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)mi R-30d可提高人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞的凋亡率;Western blot實驗發(fā)現(xiàn)miR-30d過表達使惡性表型相關(guān)蛋白MMP-2和MMP-9表達量降低;Western blot實驗結(jié)果顯示miR-30d過表達使人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白Bax的表達量提高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達量降低,因此Bax與Bcl-2的表達量(Bax/Bcl-2)比值升高,細(xì)胞凋亡過程中的重要執(zhí)行蛋白caspase-3以及細(xì)胞凋亡底物PARP表達量降低,提示caspase-3出現(xiàn)顯著的剪切活化,而PARP被剪切降解。結(jié)論:1.miR-30d可誘導(dǎo)人尤文肉瘤細(xì)胞株SK-ES-1凋亡并抑制細(xì)胞增殖。2.miR-30d可抑制人尤文肉瘤SK-ES-1細(xì)胞的侵襲和遷徙能力。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R738
【部分圖文】：

第 3 章 實驗結(jié)果第 3 章 實驗結(jié)果miR-30d 過表達可抑制人尤文肉瘤 SK-ES-1 細(xì)胞的增殖CCK-8 實驗結(jié)果顯示，與 Scramble 組相比，上調(diào) miR-30d 表達的實驗S-1 細(xì)胞在不同的時間點（24 h、48 h 和 72 h）活力均顯著下降（p<0cramble 組同空白對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），這個結(jié)果30d 能夠抑制人尤文肉瘤細(xì)胞 SK-ES-1 的生長，發(fā)揮抑癌基因的作用

19圖 2：Transwell 實驗檢測 SK-ES-1 細(xì)胞的侵襲能力瘤細(xì)胞 SK-ES-1 經(jīng) Transwell 實驗拍攝的典型圖像。（B）上中 miR-30d 表達后，尤文肉瘤細(xì)胞 SK-ES-1 的侵襲能力受到了mble 組比較，***p<0.001）

第 3 章 實驗結(jié)果3.3 miR-30d 過表達可抑制人尤文肉瘤 SK-ES-1 細(xì)胞的遷徙能力本研究使用劃痕實驗檢測 miR-30d 對人尤文肉瘤 SK-ES-1 細(xì)胞遷徙的影響。實驗結(jié)果顯示：過表達 miR-30d 的 miR-30d mimics 組細(xì)胞與 Scramble 組相比，尤文肉瘤 SK-ES-1 細(xì)胞的遷徙能力顯著下降（p<0.001），而 Scramble 同空白對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。實驗結(jié)果說明 miR-30d 能夠抑制人尤文肉瘤細(xì)胞 SK-ES-1 的遷徙能力。A

【參考文獻】

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本文編號：2813180