發(fā)布時(shí)間：2020-09-04 16:48

　　 目的:探討大鼠肺泡上皮細(xì)胞緊密連接蛋白claudin 1、3、4與肺爆震傷致肺水腫的關(guān)系。方法:將10只SD大鼠隨機(jī)等分成兩組:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用PVC(Polyvinylchlorid,聚氯乙烯)管和爆竹建立大鼠肺爆震傷模型。各組大鼠均于4小時(shí)后處死,打開胸腔,留取肺組織用于HE染色、免疫組化染色和肺泡上皮細(xì)胞基膜染色。制備肺組織膠體鑭電鏡標(biāo)本,用于觀察肺泡上皮形態(tài)及鑭顆粒的分布。制備支氣管肺泡灌洗液,應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定蛋白含量。免疫組化染色結(jié)果通過(guò)圖像分析軟件測(cè)出claudin 1、3、4含量的平均灰度代表蛋白含量。培養(yǎng)L2細(xì)胞,隨機(jī)等分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(n=6),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞經(jīng)高壓氣體作用,干預(yù)后2小時(shí)測(cè)claudin蛋白含量和單層細(xì)胞通透性。設(shè)計(jì)、篩選高效的si RNA,將培養(yǎng)好的L2細(xì)胞隨機(jī)等分成claudin1、3、4組,每組在隨機(jī)等分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組用相應(yīng)的si RNA分別干擾claudin1、3、4蛋白的表達(dá),干預(yù)后6小時(shí)測(cè)定相應(yīng)claudin蛋白含量、單層細(xì)胞通透性,并做免疫熒光實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組各大鼠在爆炸發(fā)生后均表現(xiàn)出不同程度呼吸加快及口鼻周圍出現(xiàn)粉紅色滲出液。實(shí)驗(yàn)組肺臟彌漫性腫大,色澤暗紅,表面可見大小不一的出血點(diǎn),對(duì)照組未見明顯異常。光鏡下見實(shí)驗(yàn)組肺泡腔內(nèi)彌漫性炎細(xì)胞浸潤(rùn),大量紅細(xì)胞及液體漏出,肺泡上皮細(xì)胞基膜斷裂,細(xì)胞間隔增寬,對(duì)照未見明顯異常。電鏡下見實(shí)驗(yàn)組肺泡間隔內(nèi)有大量鑭顆粒聚集,對(duì)照組僅有少量鑭顆粒進(jìn)入肺泡間隔。實(shí)驗(yàn)組claudin 1、3、4含量下降,肺水含量增加,蛋白漏出明顯相比于對(duì)照組。高壓氣體作用后實(shí)驗(yàn)組伊文思藍(lán)清楚率增加,claudin3、4含量降低,claudin1含量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。si RNA干擾后,claudin3、4實(shí)驗(yàn)組伊文思藍(lán)清除率增加,claudin1實(shí)驗(yàn)組伊文思藍(lán)清除率與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組蛋白含量較相應(yīng)對(duì)照組蛋白含量低。免疫熒光染色顯示各目標(biāo)蛋白均僅表達(dá)于細(xì)胞膜上。結(jié)論:BLI發(fā)生后緊密連接蛋白含量下降,claudin 1、3、4的含量與BLI程度呈負(fù)相關(guān),且claudin3、4在緊密連接功能變化中起到關(guān)鍵作用,蛋白含量變化導(dǎo)致上皮通透性改變,BLI后緊密連接蛋白含量與肺水腫的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R655
【部分圖文】：

圖 2-1。表 1-1 肺組織 W/D、BALF 中蛋白含量的變化(n=5， x ±s)分組 濕/干重比 支氣管肺泡灌洗液蛋白含量(ug/mL)對(duì)照組 2.42±0.39 43.37±6.79實(shí)驗(yàn)組 4.83±0.51* 197.58±11.08*注：*與對(duì)照組比較 p㩳0.05

對(duì)照組：肺泡結(jié)構(gòu)完整，未見明顯病理改變。BLI 組：肺泡腔內(nèi)可見中性粒細(xì)聚集，有的肺泡腔可見明顯的紅細(xì)胞漏出，有的肺泡腔可見液體漏出(見圖 2-3)；泡上皮細(xì)胞基膜斷裂，上皮細(xì)胞間隔增寬(見圖 2-4)。

肺泡上皮基膜染色注：藍(lán)色---肺泡上皮基膜、毛細(xì)血管基膜，紅色---細(xì)胞核，淡紅色---細(xì)胞質(zhì)；左側(cè)為對(duì)照組，基膜結(jié)構(gòu)完整；

【參考文獻(xiàn)】

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