目的:探討大鼠肺泡上皮細胞緊密連接蛋白claudin 1、3、4與肺爆震傷致肺水腫的關(guān)系。方法:將10只SD大鼠隨機等分成兩組:實驗組和對照組,實驗組應(yīng)用PVC(Polyvinylchlorid,聚氯乙烯)管和爆竹建立大鼠肺爆震傷模型。各組大鼠均于4小時后處死,打開胸腔,留取肺組織用于HE染色、免疫組化染色和肺泡上皮細胞基膜染色。制備肺組織膠體鑭電鏡標本,用于觀察肺泡上皮形態(tài)及鑭顆粒的分布。制備支氣管肺泡灌洗液,應(yīng)用紫外分光光度法測定蛋白含量。免疫組化染色結(jié)果通過圖像分析軟件測出claudin 1、3、4含量的平均灰度代表蛋白含量。培養(yǎng)L2細胞,隨機等分成實驗組和對照組(n=6),實驗組細胞經(jīng)高壓氣體作用,干預(yù)后2小時測claudin蛋白含量和單層細胞通透性。設(shè)計、篩選高效的si RNA,將培養(yǎng)好的L2細胞隨機等分成claudin1、3、4組,每組在隨機等分成實驗組和對照組,實驗組用相應(yīng)的si RNA分別干擾claudin1、3、4蛋白的表達,干預(yù)后6小時測定相應(yīng)claudin蛋白含量、單層細胞通透性,并做免疫熒光實驗。結(jié)果:實驗組各大鼠在爆炸發(fā)生后均表現(xiàn)出不同程度呼吸加快及口鼻周圍出現(xiàn)粉紅色滲出液。實驗組肺臟彌漫性腫大,色澤暗紅,表面可見大小不一的出血點,對照組未見明顯異常。光鏡下見實驗組肺泡腔內(nèi)彌漫性炎細胞浸潤,大量紅細胞及液體漏出,肺泡上皮細胞基膜斷裂,細胞間隔增寬,對照未見明顯異常。電鏡下見實驗組肺泡間隔內(nèi)有大量鑭顆粒聚集,對照組僅有少量鑭顆粒進入肺泡間隔。實驗組claudin 1、3、4含量下降,肺水含量增加,蛋白漏出明顯相比于對照組。高壓氣體作用后實驗組伊文思藍清楚率增加,claudin3、4含量降低,claudin1含量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。si RNA干擾后,claudin3、4實驗組伊文思藍清除率增加,claudin1實驗組伊文思藍清除率與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組蛋白含量較相應(yīng)對照組蛋白含量低。免疫熒光染色顯示各目標蛋白均僅表達于細胞膜上。結(jié)論:BLI發(fā)生后緊密連接蛋白含量下降,claudin 1、3、4的含量與BLI程度呈負相關(guān),且claudin3、4在緊密連接功能變化中起到關(guān)鍵作用,蛋白含量變化導(dǎo)致上皮通透性改變,BLI后緊密連接蛋白含量與肺水腫的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R655
【部分圖文】：

圖 2-1。表 1-1 肺組織 W/D、BALF 中蛋白含量的變化(n=5， x ±s)分組 濕/干重比 支氣管肺泡灌洗液蛋白含量(ug/mL)對照組 2.42±0.39 43.37±6.79實驗組 4.83±0.51* 197.58±11.08*注：*與對照組比較 p㩳0.05

對照組：肺泡結(jié)構(gòu)完整，未見明顯病理改變。BLI 組：肺泡腔內(nèi)可見中性粒細聚集，有的肺泡腔可見明顯的紅細胞漏出，有的肺泡腔可見液體漏出(見圖 2-3)；泡上皮細胞基膜斷裂，上皮細胞間隔增寬(見圖 2-4)。

肺泡上皮基膜染色注：藍色---肺泡上皮基膜、毛細血管基膜，紅色---細胞核，淡紅色---細胞質(zhì)；左側(cè)為對照組，基膜結(jié)構(gòu)完整；

【參考文獻】

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本文編號：2812354