【摘要】：目的:骨組織工程技術(shù)的發(fā)展為臨床修復(fù)骨缺損提供了新的途徑。脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)以其易獲取,增殖快,具有多向分化潛能等優(yōu)點(diǎn)逐漸受到學(xué)者們的關(guān)注。然而,臨床上運(yùn)用組織工程骨修復(fù)骨缺損的效果并不理想。研究表明因血供不足而產(chǎn)生的局部骨壞死是導(dǎo)致其修復(fù)效果不理想的原因之一。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)不僅是調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及血管形成的重要生長因子,還影響著骨的生長發(fā)育及修復(fù)。研究表明鍶(strontium,Sr)可以提高ADSCs成骨分化過程中VEGF的表達(dá)量,促進(jìn)骨缺損修復(fù)過程中的血管形成。本研究對VEGF在鍶促ADSCs成骨分化過程中的表達(dá)進(jìn)行了更加深入的研究,運(yùn)用氯化鍶、Notch信號(hào)通路阻斷劑γ-分泌酶抑制劑(DAPT)及二者共同處理成骨誘導(dǎo)的ADSCs,并設(shè)立對照組,通過比較各組間Notch信號(hào)通路相關(guān)蛋白(Notch intracellular domain,NICD)及VEGF蛋白表達(dá)量的變化情況,探究鍶促ADSCs成骨分化過程中VEGF表達(dá)升高是否與Notch信號(hào)通路相關(guān)。研究方法:1、提取ADSCs,進(jìn)行體外培養(yǎng)及鑒定。2、將傳至P3的ADSCs于成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行成骨分化培養(yǎng)。3、分別用氯化鍶、Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT及氯化鍶和DAPT共同干預(yù)預(yù)處理的ADSCs,并設(shè)置對照組,6d后提取各組細(xì)胞總蛋白。4、運(yùn)用Western Blot方法檢測各組別預(yù)處理的ADSCs中Notch信號(hào)通路蛋白NICD及VEGF的蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1、與CONTROL組的NICD(0.6715±0.0505)相比,Sr組的NICD(1.1877±0.0892)蛋白表達(dá)顯著提高(P0.01),DAPT組的NICD(0.3483±0.0262)蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01);與Sr組相比,Sr+DAPT組的NICD(0.3867±0.0291)蛋白表達(dá)顯著降低(P0.001)。2、與CONTROL組的VEGF(0.6889±0.0394)相比,Sr組的VEGF(1.3200±0.0755)蛋白表達(dá)顯著升高(P0.001),DAPT組的VEGF(0.4656±0.0266)蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01);與Sr組相比,Sr+DAPT組的VEGF(1.0575±0.0605)蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01)。結(jié)論:鍶能上調(diào)ADSCs成骨分化過程中VEGF的表達(dá)。在鍶促ADSCs成骨分化過程中,Notch信號(hào)通路被激活,并對VEGF的表達(dá)起正向調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R622
【圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果s 形態(tài)學(xué)觀察DSCs 分離提取接種后 24h，于倒置相差顯微鏡下觀察可壁，形態(tài)呈圓形。48h 觀察可見 ADSCs 基本貼壁，形態(tài)形，72h 觀察可見 ADSCs 分裂增殖呈長梭形并成簇生長s 長滿培養(yǎng)瓶底部，呈集落樣生長，方向性明顯（圖 1A）90％，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代后的 ADSCs 分裂增殖速度加0％，生長狀態(tài)良好，細(xì)胞形態(tài)均一，呈明顯方向性（圖

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文SCs 鑒定結(jié)果SCs 成脂化誘導(dǎo)后，細(xì)胞體積逐漸變大，胞體逐漸變圓，胞漿并逐漸增多，14d 油紅 O 染色倒置相差顯微鏡下觀察結(jié)果顯示脂滴被染成紅色，證明 ADSCs 具有成脂向分化潛能（圖 2A）導(dǎo)后，細(xì)胞體積逐漸增大，胞體由長梭形變成橢圓形和多角形現(xiàn)鈣結(jié)晶，20d 茜素紅染色倒置顯微鏡下觀察結(jié)果顯示細(xì)胞外成紅色，證明 ADSCs 是具有成骨向分化潛能（圖 2B）。流式示所培養(yǎng)的細(xì)胞 CD13，CD29 呈陽性表達(dá)，CD34 呈陰性表表型，表明所分離培養(yǎng)的細(xì)胞為 ADSCs（由于實(shí)驗(yàn)采用同一批果引用同組人員實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。

.3 Western Blot 法檢測 Notch 信號(hào)通路因子（NICD）及 VEGF 蛋達(dá)結(jié)果本研究所得到的結(jié)果數(shù)據(jù)是通過對同一組樣本進(jìn)行重復(fù) 3 次平行實(shí)驗(yàn)所，以β-actin 為內(nèi)參對樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組 Notch 信號(hào)通路因NICD）及 VEGF 蛋白表達(dá)結(jié)果（圖 3）。與 CONTROL 組 的 NICD （ 0.6715±0.0505 ） 相 比 ， Sr 組 的 NIC1.1877±0.0892）蛋白表達(dá)顯著提高（P＜0.01)，DAPT組的NICD（0.3483±0.026白表達(dá)顯著降低(P＜0.01）；與Sr組相比，Sr＋DAPT組的NICD（0.3867±0.029白表達(dá)顯著降低（P<0.001）。與 CONTROL 組的 VEGF（0.6889±0.0394），Sr 組的 VEGF（1.3200±0.0755）蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.001)，DAPT 組EGF（0.4656±0.0266）蛋白表達(dá)顯著降低(P＜0.01）；與 Sr 組相比，Sr＋DA的 VEGF（1.0575±0.0605）蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.01）（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Han-Tsung Liao;Chien-Tzung Chen;;Osteogenic potential: comparison between bone marrow and adipose-derived mesenchymal stem cells[J];World Journal of Stem Cells;2014年03期

本文編號(hào)：2806991