【摘要】：背景與目的疼痛是一種機(jī)體在感受到外在傷害性刺激后產(chǎn)生的不愉快感覺(jué),根據(jù)其持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短,可分為急性痛和慢性痛兩大類。其中,在慢性痛中又以慢性肌肉炎癥痛(主要表現(xiàn)為職業(yè)性肌肉疼痛以及下腰痛)最為普遍,是一直困擾人們的一類慢性疾病�，F(xiàn)有的研究表明:肌肉中存在著感受各類外界刺激的感受器,對(duì)傷害性壓力刺激,傷害性冷、熱刺激都有反應(yīng),特別是對(duì)于一些酸性物質(zhì)、各類化合物,如ATP、5-TH、IL、NGF、capsaicin等都有反應(yīng)。這些研究都基于對(duì)支配肌肉的神經(jīng)纖維的電生理記錄,對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞,特別是支配肌肉的外周神經(jīng)元細(xì)胞的特性研究較少。另外,對(duì)于肌肉炎癥痛,雖然有類似諸如中醫(yī)膏藥一樣的治療藥物,但對(duì)于肌肉疼痛內(nèi)在機(jī)制以及治療手段的研究還是很少的�，F(xiàn)在的觀點(diǎn)認(rèn)為膏藥緩解肌肉炎癥痛的機(jī)制是由于膏藥自身透過(guò)皮膚,滲透到肌肉從而發(fā)揮的鎮(zhèn)痛作用。這種說(shuō)法存在著較大的爭(zhēng)議,我們認(rèn)為其機(jī)制很可能是膏藥直接刺激皮膚,引起皮膚來(lái)源的傷害性傳入,正是由于這種非肌肉來(lái)源的傷害性傳入在脊髓的作用從而發(fā)揮的鎮(zhèn)痛效果。因此,本研究旨在探究支配脛骨前肌的DRG傷害性痛覺(jué)神經(jīng)元的基本類型和電生理特性以及探究激活皮膚來(lái)源的傷害性C纖維的傳入能否抑制大鼠深部肌肉的炎癥痛及其鎮(zhèn)痛作用發(fā)生的部位。材料與方法成年Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠,體重在180-220g之間,預(yù)先用熒光染料 1,1 '-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetrame-thylindocarbocyanine perchlorate(Dil,200ug/mL)肌肉注射標(biāo)定背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)中支配大鼠脛骨前肌的神經(jīng)元,7-12天后取材進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色確定支配脛骨前肌的神經(jīng)元類型,或是進(jìn)行在體可視DRG電生理記錄探究肌肉初級(jí)神經(jīng)元的電生理性質(zhì)。脛骨前肌注射完全弗氏佐劑(Complete Freund's adjuvant,CFA),建立大鼠肌肉炎癥痛模型,大鼠后肢承重儀測(cè)定其炎癥痛相關(guān)行為,伊文氏藍(lán)滲出實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠肌肉炎癥情況。應(yīng)用在體可視化DRG電生理記錄的方法記錄在L4、L5 DRG中特異支配脛骨前肌神經(jīng)元的電生理活動(dòng)(誘發(fā)放電、自發(fā)放電),并記錄在皮膚(脛骨前肌前)涂抹了辣椒素(CAP),芥末油(MO)以及薄荷油(PO)以后(涂抹酒精作為對(duì)照),誘發(fā)放電和自發(fā)放電的變化。在此基礎(chǔ)上,我們還在去皮膚神經(jīng)支配的炎癥痛模型上重復(fù)了上述實(shí)驗(yàn)。并觀察了在涂抹上述三種刺激性物質(zhì)于非脛骨前肌前皮膚(腳掌皮膚、大腿內(nèi)側(cè)皮膚)的神經(jīng)元放電情況。另外,在肌肉炎癥痛模型上,我們還探討了在切斷被記錄的DRG背根神經(jīng)纖維后,在脛骨前肌前皮膚涂抹上述三種刺激性物質(zhì)后神經(jīng)元放電情況。結(jié)果1、被熒光染料Dil著色的細(xì)胞主要出現(xiàn)在L3-L5DRG上,表明支配脛骨前肌的初級(jí)神經(jīng)元主要集中在L3-L5 DRG中(不存在于L2與L6 DRG中)。其中,在L4上的數(shù)量最多,達(dá)26.47±7.94個(gè)。L3和L5次之,分別為19.82±7.12和14.21±4.98個(gè)。2、對(duì)L3-L5DRG上的神經(jīng)元進(jìn)行免疫組化染色表明:在支配脛骨前肌的所有神經(jīng)元(DiI+)中,肽能神經(jīng)元(CGRP+)在DRG上分別占31%、25.78%和21.53%;非肽能神經(jīng)元(IB4+)分別占支配脛骨前肌神經(jīng)元總數(shù)45.66%、45.44%以及39.83%。TRPV1+細(xì)胞分別占支配脛骨前肌神經(jīng)元數(shù)量26.94%、27.32%、32.09%。3、在正常大鼠中,記錄到的肌肉C傷害性痛覺(jué)神經(jīng)元中(傳導(dǎo)速度在1.5m/s以下),其機(jī)械疼痛閾值較支配皮膚的疼痛神經(jīng)元明顯增高(達(dá)到80mN以上),其感受野都位于脛骨前肌上,感受野面積較位于皮膚上的感受野相比明顯更廣,且外周感受野部位易發(fā)生變化。4、在大鼠脛骨前肌注射CFA2d后,大鼠脛骨前肌就出現(xiàn)明顯的腫脹。大鼠后肢承重實(shí)驗(yàn)表明,在注射CFA 1d后大鼠實(shí)驗(yàn)側(cè)后肢承重能力較對(duì)側(cè)明顯下降。伊文氏藍(lán)滲出實(shí)驗(yàn)表明大鼠患肢脛骨前肌出現(xiàn)了明顯的肌肉炎癥。5、在體電生理實(shí)驗(yàn)表明,在炎癥痛大鼠中,L4及L5DRG上特異支配脛骨前肌的初級(jí)神經(jīng)元,其外周感受野對(duì)機(jī)械刺激的的敏感性明顯升高,并出現(xiàn)自發(fā)放電的情況。并且這種機(jī)械閾值的下降和自發(fā)放電可以被在脛骨前肌的皮膚上涂抹CAP、MO、PO三種刺激性物質(zhì)所逆轉(zhuǎn)。行為學(xué)的后肢承重實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。6、在去皮膚神經(jīng)支配的炎癥痛大鼠模型中,皮膚涂抹上述三種物質(zhì),其鎮(zhèn)痛效果消失。并且將上述三種物質(zhì)涂抹于非脛骨前肌前的皮膚(腳掌、大腿內(nèi)側(cè)皮膚),也無(wú)鎮(zhèn)痛效果。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)同樣證明了這一點(diǎn)。在剪斷記錄神經(jīng)節(jié)背根的肌肉炎癥痛大鼠中,皮膚涂抹上述3種物質(zhì)也無(wú)任何鎮(zhèn)痛效果。結(jié)論1、DRG中特異支配脛骨前肌的初級(jí)神經(jīng)元只分布于L3-L5 DRG中,這些神經(jīng)元中,肽能神經(jīng)元(CGRP+)、非肽能神經(jīng)元(IB4+)以及TRPV1+神經(jīng)元都有。2、支配肌肉的初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元,其對(duì)于外界機(jī)械刺激反應(yīng)的閾值較支配皮膚的神經(jīng)元高,外周感受野的范圍也更廣,且易發(fā)生移動(dòng)。3、往肌肉表面的皮膚涂抹激活皮膚傷害性C纖維傳入的物質(zhì),能夠緩解CFA引起的肌肉炎癥痛,其鎮(zhèn)痛作用發(fā)生的機(jī)制主要是化合物直接刺激皮膚后產(chǎn)生的傷害性傳入對(duì)肌肉疼痛的抑制作用。4、激活與肌肉傳入纖維在脊髓當(dāng)中位于同一節(jié)段或是相鄰節(jié)段的皮膚支配神經(jīng)傷害性傳入才能鎮(zhèn)痛。5、激活肌肉表面皮膚傷害性傳入纖維,緩解CFA引起的肌肉疼痛的機(jī)制可能存在于脊髓或大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R685
【圖文】：

逑３、肌肉傷害性感覺(jué)神經(jīng)元的電生理特性逡逑在正常大鼠中，對(duì)Ｌ４邋ＤＲＧ中ＤＨ標(biāo)記的神經(jīng)元進(jìn)行在體電生理記錄（圖６邋Ａ、逡逑Ｂ所示），記錄時(shí)測(cè)量記錄到細(xì)胞的傳導(dǎo)速度（圖６Ｃ示意一個(gè)測(cè)到傳導(dǎo)速度的細(xì)逡逑胞及其外周感受野），以此判斷神經(jīng)元類型。以機(jī)械刺激來(lái)搜索有反應(yīng)的神經(jīng)元逡逑（圖６Ｄ示一個(gè)對(duì)外界機(jī)械刺激有反應(yīng)的神經(jīng)元）我們發(fā)現(xiàn)在記錄到的Ｃ傷害性逡逑痛覺(jué)神經(jīng)元中（傳導(dǎo)速度在１．５ｍ／ｓ以下），其機(jī)械疼痛閾值較支配皮膚的疼痛神逡逑經(jīng)元明顯增高，達(dá)到８０ｍＮ以上的機(jī)械刺激才能誘發(fā)神經(jīng)元的放電（如圖６Ｅ、Ｆ逡逑和Ｉ所示），小于此機(jī)械強(qiáng)度的刺激只能激活神經(jīng)元產(chǎn)生極少的動(dòng)作電位（３個(gè)／ｓ逡逑以下）。在測(cè)得外周軸突傳導(dǎo)速度的神經(jīng)元中，大部分（８／１０）為Ｃ類（傳導(dǎo)速逡逑度＜１．５ｍ／ｓ）（如圖６Ｇ、Ｈ），其平均機(jī)械閾值為１２４．５６±４０．４５ｍＮ。對(duì)記錄到的８逡逑個(gè)Ｃ傷害性疼痛神經(jīng)元的外周感受野部位進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)

腿脛骨前肌出現(xiàn)明顯腫脹，從注射ＣＦＡ后一天開始，測(cè)量右側(cè)脛骨前肌中間腫脹逡逑部分肌肉的外圍直徑與左側(cè)相比存在明顯差異，且隨著時(shí)間的推移，肌肉腫脹得逡逑到了緩解。（如圖７Ａ、Ｂ所示）在注射ＣＦＡ前后分別在６只老鼠上進(jìn)行大鼠后肢承逡逑重實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，與左腿相比，在注射ＣＦＡ１天以后，右側(cè)患肢的的承重能力逡逑顯著下降，且這一顯著性差異可以維持到注射ＣＦＡ后至少６天。（如圖７Ｄ所示）為逡逑了衡量患肢的炎癥程度，伊文氏藍(lán)滲出實(shí)驗(yàn)在大鼠注射ＣＦＡ兩天之后進(jìn)行。如圖逡逑７Ｃ所示，右側(cè)肌肉當(dāng)中的伊文氏藍(lán)滲出較左側(cè)有顯著差異，達(dá)到５３．０８±１６．３７ｕｇ／ｇ逡逑的水平。上述指標(biāo)共同說(shuō)明了在大鼠脛骨前肌注射ＣＦＡ后，在很短時(shí)間內(nèi)（１天以逡逑內(nèi)）就會(huì)出現(xiàn)肌肉炎癥，且大鼠出現(xiàn)了明顯的肌肉痛行為學(xué)。逡逑Ａ邐Ｂ６０ｉ邋：逡逑：NB？ｓ，邋＞逡逑邐邐逡逑�。�？＞？？邋ａｆｔｅｒ邋ｉｎｊｅｃｌｉｏｎ（ｄ）逡逑ｆ８０ｉ邐ｎ邋°１邋？—Ｉｔ逡逑ｉ．邐Ｍ邐＇邐（ｎ＝６）邐ＪＬ逡逑ｉ－煖煖邋＋邐Ｉ－２0－邋ｉｎＪｅｃｒ邋／逡逑ｉｉｉｔｎ卜以逡逑＊＊邋＊＊逡逑＊６０邋１邋ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ逡逑0Ｊ＿焌~枦蘟鴭

本文編號(hào)：2804772