【摘要】：目的本研究的目的是探討在雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠腰椎小關(guān)節(jié)內(nèi)注射Ⅱ型膠原酶(type Ⅱ collagenase injection,CⅡ)誘導(dǎo)腰椎小關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(lumbar facet joint osteoarthritis,LFJOA)模型的可行性,并使用甲狀旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)干預(yù)該模型,研究PTH對(duì)關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨以及大鼠疼痛的影響。方法30只3月齡SPF級(jí)雄性SD鼠隨機(jī)分為3組:對(duì)照組(Sham組)10只、Ⅱ型膠原酶注射組(CⅡ組)10只和Ⅱ型膠原酶注射+甲狀旁腺激素(1-34)組(PTH組)10只。CⅡ組和PTH組進(jìn)行手術(shù)并在腰椎小關(guān)節(jié)(lumbar facet joints,LFJ)(右側(cè)L3 L4,L4 L5,和L5 L6小關(guān)節(jié))腔內(nèi)注射Ⅱ型膠原酶,Sham組則僅行手術(shù)而不注射膠原酶。在術(shù)前(0天)及術(shù)后3,14,28,56天對(duì)大鼠進(jìn)行觸覺性痛覺檢測,測量大鼠右后足50%縮足閾值(paw withdrawal thresholds,PWT),術(shù)后PTH組大鼠皮下注射PTH進(jìn)行干預(yù),劑量為30ug/kg/1week,CⅡ組給予等量生理鹽水皮下注射,給藥8周后處死所有動(dòng)物收集標(biāo)本,將標(biāo)本用4%甲醛溶液固定72小時(shí)后,先進(jìn)行Micro-CT檢測,再脫鈣12周。將脫完鈣的標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋切片,行甲苯胺藍(lán)染色,甲苯胺藍(lán)染色切片用改良Mankin組織學(xué)評(píng)分對(duì)軟骨退變情況進(jìn)行評(píng)估;進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,檢測軟骨中聚集蛋白多糖(aggrecan,AGG)及含凝血酶敏感素基序的整合素和金屬蛋白酶4(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS-4)的表達(dá)情況。收集各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1 Sham組FJ軟骨幾乎沒有發(fā)生退變,軟骨表面光滑,軟骨基質(zhì)甲苯胺藍(lán)染色著色較深;CⅡ組與Sham組相比,FJ軟骨退變明顯,軟骨細(xì)胞數(shù)量減少,軟骨出現(xiàn)廣泛損傷、裂縫,甚至剝脫,改良Mankin評(píng)分顯著升高(P0.05);使用PTH干預(yù)后,軟骨退變情況較CⅡ組明顯減輕,改良Mankin評(píng)分顯著降低(P0.05)。2 CⅡ組與Sham組相比,軟骨基質(zhì)AGG表達(dá)顯著減少(P0.05),ADAMTS-4表達(dá)顯著增多(P0.05);PTH組與CⅡ組相比,軟骨基質(zhì)AGG表達(dá)顯著增加(P0.05),ADAMTS-4表達(dá)顯著減少(P0.05);PTH組與Sham組相比,AGG和ADAMTS-4的表達(dá)無顯著差異(P0.05)。3 CⅡ組與Sham組相比,骨密度(BMD),骨小梁相對(duì)體積(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th)均顯著降低(P0.05);PTH組與CⅡ組相比,BMD,BV/TV和Tb.Th均顯著升高(P0.05);BMD,BV/TV和Tb.Th在PTH組和Sham組之間無顯著差異(P0.05)。4 Sham組大鼠50%縮足閾值(50%PWT)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未發(fā)生明顯變化。術(shù)后3天起,CⅡ組與PTH組大鼠50%PWT均顯著降低,但在術(shù)后3、14、28、56天這四個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,PTH組的50%PWT均顯著高于CⅡ組(P0.05)。結(jié)論LFJ關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射Ⅱ型膠原酶可以成功建立大鼠LFJOA模型,導(dǎo)致其關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的退變,引起痛覺過敏。PTH干預(yù)可以延緩Ⅱ型膠原酶誘導(dǎo)的大鼠LFJ軟骨的損傷、軟骨下骨微結(jié)構(gòu)的破壞,并在一定程度上減輕大鼠的痛覺過敏。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R684.3
【圖文】：

Sham 組；B，CII 組；C， PTH 組；D，改良 Mankin 評(píng)分結(jié)果：& vs. Sham 組, P<0.05 ；# vs. CIIgroup, P<0.05。免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果1）AGG 免疫組化染色結(jié)果Sham 組 AGG 免疫組化染色陽性表達(dá)區(qū)域均勻分布于軟骨基質(zhì)和軟骨細(xì)胞中，呈深棕黃色； CII 組 AGG 免疫組化染色著色變淺，AGG 陽性表達(dá)減少。PTH 組 AGG 陽性表達(dá)區(qū)均勻分布在軟骨基質(zhì)和軟骨細(xì)胞中，呈深棕黃色。CII 組與 Sham 組比較，AGG 免疫組織化學(xué)染色測得的平均光密度值顯著降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PTH 組與 CII 組比較，平均光密度值顯著增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PTH 組與 Sham 組比較，平均光密度值有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）（圖 2）。1.2.3

2）ADAMTS-4 免疫組化染色結(jié)果ADAMTS-4 是一種軟骨基質(zhì)降解酶，在正常的軟骨細(xì)胞中表達(dá)較少，隨著 OA的進(jìn)展加重，其表達(dá)也隨之增加。Sham 組 ADAMTS-4 免疫組織化學(xué)染色著色淺，ADAMTS-4 陽性表達(dá)細(xì)胞很少。CII 組 ADAMTS-4 免疫組織化學(xué)染色著色變深，ADAMTS-4 陽性表達(dá)細(xì)胞增加，呈深棕黃色。PTH 組 ADAMTS-4 免疫組織化學(xué)染色著色變淺，ADAMTS-4 陽性表達(dá)細(xì)胞減少。CII 組與 Sham 組比較，ADAMTS-4 免疫組化染色測得的平均光密度值顯著增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PTH 組與 CII 組比較，平均光密度值顯著降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PTH 組與 Sham 組比較，平均光密度值稍顯增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）（圖 3）。

降低（P<0.05）；PTH 組與 CII 組相比，BMD，BV/TV 和 Tb.Th 均顯著升高（P<0.05）；BMD，BV/TV 和 Tb.Th 在 PTH 組和 Sham 組之間無顯著差異（P>0.05）；表明發(fā)生 FJOA 時(shí)，不僅軟骨發(fā)生退變，還涉及軟骨下骨微結(jié)構(gòu)的改變，并且 PTH 干預(yù)可以延緩軟骨下骨的退變（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2797956